Для расчета продолжительности стерилизации оборудования используют лабораторные экспериментальные данные по кинетике выживаемости микроорганизмов, устойчивых к антимикробному средству и способных вызвать порчу консервированного продукта. Для испытания спороцидного действия влажного пара под давлением в качестве тест-культур рекомендуется использовать В. stearothermophilus (или Б. aerotherrnophilus) и Сl. sporogenes 25 (или гнилостный анаэроб 3679); для перегретого пара - В. polymyxa; для антимикробных химических средств - также В. polymyxa и, кроме того, В. subtilis varniger. Бактерицидное действие препаратов в медицинской практике обычно проверяют на стафилококках. Выбор тест-культур применительно к подбору средств и параметров стерилизации оборудования для асептического консервирования плодоовощных консервов имеет особенность, которая заключается в необходимости проверки эффективности летального действия препаратов на плесени и дрожжи.
Кинетические данные о гибели микроорганизмов получают в экспериментах с биологическими тестами, т.е. с тест-культурами, нанесенными на пластинки обычно размером 5x5 см2, изготовленные из материалов (нержавеющая сталь, фторопласт, пищевая резина, стекло, металл с защитными покрытиями на базе эпоксидных и других смол, белая жесть и т. п.), подлежащих стерилизации. Перед использованием пластинки моют и стерилизуют в воде под давлением (20-30 мин при 120° С). На стерильную поверхность пластинки наносят 106- 107 клеток тест-культуры микроорганизма, находящегося в стационарной фазе развития, или такое же число зрелых блестящих спор. Полученные биологические тесты подсушивают, до исчезновения видимой влаги (15-16 ч при 30° С) и обрабатывают с помощью исследуемого средства. Обработку биологических тестов влажным или перегретым паром проводят в модельном автоклаве, жидкими химическими препаратами - в эмалированных лотках или чашках Петри. В зависимости от предполагаемого способа обработки оборудования (стационар-нос заполнение, циркуляционная обработка с заданной скоростью движения, орошение под избыточным давлением) биологические тесты либо погружают в раствор соответствующего препарата, либо опрыскивают с определенной скоростью поступления струи на пластинку соответствующим количеством препарата так, чтобы во время орошения он полностью покрывал инфицированную поверхность пластинки. Обработку парами химических веществ или газом чаще всего проводят в стеклянных эксикаторах. Во всех случаях надо использовать температуры, которые будут созданы во время стерилизации оборудования в производстве и при постоянном давлении и (или) концентрации антимикробного средства. Растворы препаратов желательно готовить на воде, соответствующей по жесткости и рН воде, применяемой в производстве.
В процессе обработки через определенные интервалы времени биологические тесты извлекают (по 6 тестов на каждый интервал времени), отмывают от остатков химических препаратов в большом объеме стерильной воды (300-400 см3) и подвергают микробиологическому анализу. Для этого зараженную поверхность биологических тестов протирают слегка увлажненными ватными или марлевыми тампонами. Тампоны помещают в пробирку с бусами в 10 см3 воды или нейтрализатора испытуемого химического препарата. После 10-минутного встряхивания пробирки с тампоном из полученной в ней микробной взвеси приготавливают серию разведений и высевают их для подсчета числа выживших микроорганизмов на агаризованные питательные среды. Контролем служат аналогичные биологические тесты, обработанные вместо антимикробного средства стерильной водой. По результатам подсчета количества выживших микроорганизмов строят кривые выживаемости), в полулогарифмической или логарифмической системах координат. Систему координат выбирают таким образом, чтобы кривые выживаемости были выражены прямыми линиями. Из полулогарифмической прямой графически определяют величину D- время, необходимое для уменьшения числа клеток тест-культуры в 10 раз. Вместо Dчасто экспериментально определяют величину F- время, необходимое для гибели определенного числа клеток на пластинках. Продолжительность стерилизации, обеспечивающую гибель микроорганизмов в надлежащей степени, вычисляют из уравнения
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.