Обнаружение в воде БГКП указывает на ее фекальное загрязнение и свидетельствует о возможном присутствии в воде возбудителей указанных выше кишечных заболеваний. Таким образом, БГКП выполняют роль санитарно-показательных микроорганизмов при определении доброкачественности питьевой воды, пищевых продуктов, санитарного состояния технологического оборудования. В стандартах предусмотрены предельно допустимые нормы содержания бактерий кишечной группы в воде и продуктах питания.
БГКП объединяет группу сходных между собой бактерий: Eschеrichia coli commune, Escherichia coli citrovomm, Escherichia coli aerogenes, Bad paracoli и др.
Основными морфологическими и физиологическими признаками этой группы являются следующие:
1) короткие бесспоровые, грамотрицательные, в большинстве своем подвижные палочки;
2) аэробы и факультативные анаэробы;
3) сбраживают сахара: глюкозу, лактозу, маннит (в зависимости от разновидности) при температурах 43-45°С в течение 24 часов с образованием кислоты и газа;
4) растут на фуксиносульфитном агаре (среда Эндо) в виде темно-красных колоний с металлическим зеленовато-золотистым блеском или красных и розовых колоний с более темным центром.
При санитарно-гигиенической оценке воды важно не только найти БГКП, но необходимо учесть и количество этих бактерий, что позволит судить о степени фекального загрязнения воды. Для учета в воде определяют титр кишечной палочки (coli - титр) и индекс (coli- индекс). Коли-титром называется наименьшее количество воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна палочка БГКП, коли-индекс – это число палочек, найденных в одном литре исследуемой воды.
По ГОСТу 2874 – 82 для питьевой воды, прошедшей очистку, коли-титр должен быть не ниже 300, коли-индекс - не более 3, общее количество микроорганизмов - не более 100 в 1 мл воды.
Для определения общего количества микроорганизмов, в 1 мл. воды делают глубинный посев 1 мл исследуемой воды на 1 мясопептонный агар (МПА) в чашку Петри. Если вода сильно загрязнена, посев проводят с разведением (в зависимости от степени загрязненности). Методика посева с разведением описана в работе 6.
Посевы воды выращивают в термостате при температуре 30-35°С в течение 24-18 ч., после чего подсчитывают количество колоний на чашке. Подсчет колоний и определение количества микроорганизмов в 1 мл проводится по методике также описанной в работе 6. Во принятым нормам считается, что хорошая питьевая вода содержит в 1мл до 100 микроорганизмов, сомнительная от 100 до 500 микроорганизмов, загрязненности выше 500 вода требует очистки.
Для определения титра кишечной палочки в воде предложены методы бродильных проб, мембранных фильтров и других. Бродильный метод основан на способности БГКП сбраживать сахара с образованием газа и кислот в условиях повышенных температур (43°-45°С).
Для посева воды используется жидкая среда Булира (мясная вода - 1 л, пептон – 10 г, маннит – 15г, NaCl – 5г, 1% водный раствор нейтральрот-2 мл, который добавляют после доведения рН среды до 7,0-7,2). Указанная среда разливается в пробирки с маленькими перевернутыми пробирочками (поплавками) и стерилизуется дробно или 30 мин. при 0,5 атм. в автоклаве.
Для посева берут 1 мл. исследуемой воды, (методика посева с разведением описана в работе 6).
Засеянные пробирки ставят на 45 часов в термостат при температуре 43°-45°С максимальной для БГКП, но угнетающей развитие большинства других сапрофитных микроорганизмов. При развитии БГКП на среде Булира отмечают следующее:
1) помутнение (развитие бактерий);
2) накопление газа в поплавках (сбраживание маната);
3) изменение окраски (кишечная палочка восстанавливает нейтральрот, благодаря чему красная окраска исчезает и среда приобретает соломенно-желтый цвет). Если газа и мути нет, это указывает на отсутствие фекального загрязнения. Наличие газа и помутнения или только помутнения указывает на возможность присутствия БГКП. Посев на среду Эндо. В связи с тем, что в пробах исследуемой воды, а также а смывах с оборудования, сырья, полуфабрикатов, пищевых продуктов, рук работников и других объектов могут присутствовать различные бактерии, сбраживающие маннит с образованием газа, то для точного установления наличия БГКП из забродивших пробирок делают пересев на специфическую среду Эндо (способ приготовления указан на этикетки промышленно приготовленной сухой среды Эндо). Готовая среда в расплавленном состоянии имеет красноватый цвет, застывшая в чашках Петри – кремовый.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.