Микробиология: Лабораторный практикум, страница 16

При культивировании на плотных питательных средах из отдельных клеток микроорганизмов, содержавшихся в исследуемой пробе того или иного материала (продукта, воды, смыва с оборудования и т.д.) образуются их массовые скопления называемые колониями. Колонии имеют характерные для каждого вида микроорганизмов отличия по размерам, форме, окраске, консистенции и др. признакам. По размерам колонии в большинстве случаев хорошо различимы невооруженным глазом и легко поддаются прямому визуальному подсчету.

Питательные среды используемые для культивирования микроорганизмов должны содержать достаточное количество необходимых для их развития органических веществ - белков, углеводов, витаминов, а также минеральных макро и микроэлементов. Многие виды микробов очень требовательны к составу питательной среды и нуждаются в разнообразном наборе витаминов и ростовых веществ, например молочнокислые бактерии.

Питательные среды могут быть натуральными (естественными) и искусственными. В качестве натуральных сред используются некоторые продукты растительного или животного происхождения: молоко, животные ткани, вареные овощи (картофель, морковь) и др.

На натуральных средах хорошо развиваются многие виды микроорганизмов, однако ввиду сложного и непостоянного химического состава такие среды мало пригодны для изучения процессов метаболизма у микробов. Наиболее широко используются искусственные или полусинтетические среды_, которые готовятся на основе мясных, рыбных и растительных отваров с добавлением дополнительных питательных веществ-пептона, Сахаров, витаминов и др.

По назначению различают универсальные (стандартные) и элективные (избирательные) среды. Универсальные применяются для культивирования многих видов микроорганизмов. Для определения количественного и группового состава мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий (КМАФАнМ) широко используют: мясопептонный бульон (МБП), и мясопептонный агар (МПА). Мясопептонные среды содержат достаточное количество азотистых соединений, необходимых для роста и развития бактерий, постоянно встречающихся на сырье, полуфабрикатах и разных видах пищевых продуктов.

Не охмеленное солодовое сусло и сусловый агар (СА) являются универсальными для многих видов плесневых грибов и дрожжей. Эти среды содержат сахара, необходимые для жизнедеятельности указанных микроорганизмов.

По физическому состоянию различают жидкие и плотные среды. Жидкие (МПБ и солодовое сусло) используют для выяснения физиолого-биохимических свойств микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена.

Плотные среды готовят путем добавления к жидким желатина или агара. Желатин - вещество белковой природы, которое получается при вываривании костей и хрящей. Для создания плотной среды к МПБ добавляют 10-15% нарезанного желатина, и нагревая, расплавляют его, а затем, охлаждая, дают затвердеть. Но желатин имеет большой недостаток, мешающий в практической работе, так как температура плавления его около 24-27 °С. В настоящее время желатиновые среды используются, главным образом при диагностике микроорганизмов. Известно, что одни виды бактерий разжижают желатин (под действием протеолитических ферментов, содержащихся в клетках), а другие не разжижают. Это характерное свойство используется при определении вида бактерий.

Для выращивания микроорганизмов с целью подсчета количества и изучения внешнего вида колоний широко применяют агаровые среды. Агар-агар добывают из морских водорослей, он состоит, главным образом, из сложных углеводородов (полисахаридов). Для получения плотной питательной среды в МПБ или в пивное сусло добавляют 1,5-2,5% агара. Температура плавления агара около 100 °С, что является преимуществом агаровых сред, так как на них можно выращивать культуры микроорганизмов при различных температурах. Использование плотных сред необходимо для следующих целей:

а) изучение морфологии колоний – при диагностике микроорганизмов;

б) количественного учета микроорганизмов;