Микробиология: Лабораторный практикум, страница 20

При посеве «газоном» предварительно расплавленную среду разливают (по 10-12 мл) в стерильные чашки Петри. На застывшую среду посев микроорганизмов производится петлей в виде параллельных штрихов или внесенный материал равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем. Посев «газоном» применяют для выделения чистых культур микроорганизмов из одной колонии, а также при изучении внешнего вида колоний разных видов. Указанный способ используется также для учета микроорганизмов в воздухе (метод оседания).

Все посевы помещают в термостат для выращивания. Во избежание попадания на поверхность конденсационной влаги чашки с посевами укладывают в термостат перевернутыми вверх дном.

Для роста и размножения микробов на питательных средах необходимы определенные температурные условия. Дрожжевые и мицелиальные грибы, а также многие сапрофитные бактерии относятся к группе мезофилов, т.е. оптимальной температурой для их развития является 25-30°С. Патогенные микробы лучше растут при температуре 37°С.

Существуют микробы, требующие более низких или более высоких температур для своего развития. Так, например, температурный оптимум психорофилов (холодолюбов) 6-10°С, а температурный оптимум для термофилов достигает 50-60 °С. Все различия в биологии микроорганизмов необходимо учитывать при их культивировании, в связи с чем посевы выращиваются в термостатах, который представляют собой шкафы, где поддерживаются соответствующая постоянная температура с помощью специальных терморегуляторов.

Для определения количества микроорганизмов в единице массы (в 1г.) любого продукта, непосредственно в колбу Эрленмейера со 100 мл. стерильной водопроводной воды берут навеску продукта массой от 5 до 10 г. (взвешивают на технических весах с точностью до 1 г.). Затем производят смыв путем взбалтывания пробы в колбе в течение 10 мин. горизонтальными, кругообразными движениями (при этом нельзя смачивать ватную пробку). Получаем 1-ое разведение количества микроорганизмов 1:100. Далее осуществляется разведение путем разбавления полученного смыва в 1000, 10000 и более раз стерильной водой. Для этой цели берут несколько пробирок с 9 мл. стерильной воды в каждой. Стерильной пипеткой вносят 1 мл смыва из колбы в первую пробирку и тщательно перемешивают. Получают разведение 1:1000 из первой пробирки той же пипеткой переносят 1 мл во вторую и получают разведение 1:10 000 и т.д.

Из полученных разведений делают посев по 1 мл. в две стерильные, заранее подписанные чашки Петри. Схема разведений, посев и разливка агара в чашки представлены на рис. 15. следует отметить, что чем больше взято пробирок для разведений, тем больше будет ошибка в конечном подсчете количества микроорганизмов в 1 г. продукт. Внесенный в чашки материал (1 мл смыва) заливают соответствующей, предварительно расплавленной и охлажденной до t 40-45°С, питательной средой. Одну из двух чашек заливают МПА – для вырвщивания колоний бактерий, другую – СА – для выращивания грибов. После застывания среды перевернутые чашки помещают в термостат при t = 28-30° на 48-72 часа. Выросшие на агаре колонии подсчитывают со стороны дна чашки. При этом условно считается, что каждая колония развилась из отдельной микробной клетки. каждую отсчитанную колонию помечают, нанося на ней чернилами точку. Разведение и посев считаются правильно выбранными, если в чашке выросло от 100 до 500 колоний бактерий и от 20 до 50 колоний грибов.

Чашки, в которых выросло менее 10 колоний бактерий и менее 5 колоний плесеней – в расчет не принимаются. Подсчитав количество колоний на чашке, определяют число микроорганизмов (бактерий и грибов отдельно) в 1г продукта по уравнению: A=(b × c)/d, где А-количество микроорганизмов в 1г продукта; b-число колоний на чашке; c-разведение (1:100; 1:1000 и т.д.); d-навеска продукта (г).

Например, при подсчете на чашке обнаружено 320 колоний, разведение 1000, навеска продукта 5г. Определяем количество микроорганизмов в 1г продукта: (320 × 1000)/5 = 64000 или 6,4 × 10⁴КОЕ/г.