Микробиология: Лабораторный практикум, страница 10

Окраска по Граму проводится следующим образом:

1.На одном предметном стекле готовят три мазка из бактериальных культур: заведомо известной Грамположительной, исследуемой и заведомо известной Грамотрицательной.

2.Мазки высушивают и фиксируют пламенем.

3.Окрашивают карболовым раствором генцианвиолета в течении 1-2 мин.

4.Краску удаляют стряхиванием, на мазки наносят раствор Люголя (раствор У в КУ) и выдерживают 1-2 мин. до почернения мазка.

5.Сливают раствор Люголя и на препарат наносят несколько капель 96% спирта и слегка покачивая стекло, выдерживают его до осветления мазка. (20-30с).

Препарат немедленно промывают водой. От обработки мазка спиртом зависит результат всего окрашивания: при недостаточной обработку все бактерии сохраняют окрашивание, при излишней – все клетки обесцвечиваются.

6.Дополнительно окрашивают препарат фуксином Пфейффера (разведенный фуксин) в течение 2 мин.

7.Краску смывают, препарат подсушивают и смотрят с иммерсионным объективом 90х.

Если препарат приготовлен правильно, то в поле зрения видны Грам + темно-фиолетовые клетки и рядом с ними хорошо различаются бледно-розовые Грамотрицательные.

Задание 1

а) Приготовить фиксированные препараты культур бактерий: Pseudomonas fluoresceus, Bacillus Subtilis, Bacillus mycoides, Micrococcus, Staphylococcus, Sarcina и покрасить фуксином.

б) Микроскопировать все препараты с иммерсионным объективом. Описать и зарисовать, обратив внимание на форму и сочетание клеток. Изучая препараты спорообразующих палочек, найти равномерно окрашенные палочки без спор и палочки со спорами, у которых окрашиваются только контуры и концы клеток, а в центре остаются бесцветные блестящие тельца овальной формы - споры.

Задание 2

Провести наблюдения активной подвижности бактерий в раздавленной капле. Для этой цели приготовить препараты из культур Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis. Смотреть с иммерсионным объективом.

Задание 3

Выяснить отношение к окраске по Граму исследуемых культур бактерий: Bacillus subtilis, Escherichiacoli, Staphylococcus aureus, Erwiniae herbicola. В качестве контрольных использовать культуры: Sar ста(Грам +) и Pseudomonas fluorescens (гpaм-). Микроскопировать с иммерсионным объективом 90х. Зарисовать.

Работа 3.   МОРФОЛОГИЯ ДРОЖЖЕЙ И ИХ МИКРОСКОПИРОВАНИЕ

Дрожжи - это одноклеточные грибы, широко распространенные в при роде. Они часто встречаются в почве, в воде, на плодах, листьях винограда, ягодах, составляя их эпифитную микрофлору. Многие виды используются в разных отраслях промышленности - хлебопечении, пивоварении, виноделии, получении спирта. Имеются вредители, вызывающие порчу пищевых продуктов, нарушающие ход бродильных процессов и даже патогенные дрожжи.

В настоящее время установлено, что дрожжи имеют разные корни происхождения, однако большинство дрожжей, имеющих наиболее важное значение в практике, отнесены к классу аскомицетов. При определенных условиях развития их клетки превращаются в аски (сумки) внутри которых образуются споры. При выращивании дрожжей на плотных питательных средах образуются колонии разного цвета, формы и консистенции. В большинстве своем они округлые, гладкие,выпуклые, плотные, реже слизистые. По цвету они могут быть белыми, кремовыми, желтовато-оранжевыми, розовыми и других оттенков. Форма и цвет колоний имеет значение при диагностике дрожжей. По форме клетки дрожжей бывают круглые, овальные, яйцевидные, лимоновидные и др. Строение клетки типичное для эукариот, размеры варьируют в длину от 2-3 мкм до 20-50 мкм. Клетки дрожжей богаты питательными веществами - белками, жиром, витаминами и могут быть использованы для кормовых целей.

Наиболее обычным способом вегетативного размножения, которое характерно для большинства дрожжевых организмов, является почкование. Некоторые виды размножаются делением. Кроме почкования и деления многие дрожжи способны размножаться с помощью спор. У некоторых образованию сумок со спорами (асков) предшествует половой процесс, иногда споры образуются без предварительного слияния клеток. Спорообразование у дрожжей – это одновременно процесс размножения и средство к сохранению жизнеспособности в неблагоприятных условиях.