Микробиология: Лабораторный практикум, страница 19

3.Включают автоклав в электрическую сеть.

4.После закипания воды начинает выходить сильная струя пара из крана. После полного удаления воздуха паром (продувка автоклава) закрывают кран и следят по манометру за давлением. Время стерилизации отмечают с момента установления необходимого давления. Большинство питательных сред, а также водопроводную воду в автоклаве стерилизуют при 1 атм в течении 20-30 мин., что соответствует t = 121 °С. Такая температура убивает не только бактерии, но и их споры. Легко разрушающиеся и карамелизующиеся среды (молоко, сусловый агар, агар Чапека и др.) стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 20-30 мин. , что соответствует t = 112 °С.

5. После окончания стерилизации автоклав отключают, осторожно выпускают пар, отвинчивают крышку и достают простерилизованные материалы.

Если кран будет открыт слишком рано, то стерилизуемая жидкость может вскипеть и выбросить ватные пробки.

Холодная стерилизация осуществляется фильтрованием через специальные мелкопористые фильтры в заранее простерилизованную посуду. Этот прием холодной стерилизации применяется для тех питательных сред, которые изменяют свой состав и свойства даже при незначительном нагревании.

Сущность этого метода стерилизации основана на том, что малые поры фильтра легко пропускают раствор, но задерживают микроорганизмы, за исключением ультрамикробов (вирусов и бактериофагов).

Бактериальные фильтры готовят из разных материалов. Наиболее часто употребляются фильтры из фарфоровой глины, асбеста и мембранные ультрафильтры. Химический метод стерилизации называется дезинфекцией. Дезинфекция - это способ уничтожения микроорганизмов при помощи сильно действующих химических веществ-антисептиков.

Бактерицидное действие проявляют многие окислители: хлор, перекись водорода, пермаганат калия, неорганические кислоты – сернистая борная, органические соединения – формалин, фенолы, этиловый и бутиловый спирты и др.

В лабораторной практике дезинфекцию применяют для обеззараживания рабочего стола, рук, инструментов и т.д.

Задание

1. Приготовить МПА (из сухого концентрата), сусло-агар, среду Чапека. Установить нужную рН. Сделать ватные пробки. Разлить среды в колбы и пробирки (1/3 объема) сдать в стерилизацию.

2. Подготовить к стерилизации посуду - чашки Петри, пипетки, пробирки.

3. Ознакомится с работой автоклава и других способов, применяемых для стерилизации питательных сред, воды и посуды.

Работа 6. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО УЧЕТА И АНАЛИЗА СОСТАВА МИКРОФЛОРЫ РАЗНЫХ ВИДОВ ПИЩЕВОГО СЫРЬЯ, ПОЛУФАБРИКАТОВ И ГОТОВОЙ ПРОДУКЦИИ

Наиболее простым и широко распространенным методом количественного учета микроорганизмов в указанных объектах является стандартный метод подсчета выросших колоний на плотных питательных средах в чашках Петри.

Культивирование микроорганизмов на питательных средах осуществляется посевом. Посевом называется внесение в стерильную питательную среду какого-либо исследуемого материала для выявления в нем микроорганизмов. Посевы применяются для определения количественного и качественного состава микрофлоры в любом исследуемом объекте: воде, пищевых продуктах, воздухе помещений, поверхности оборудования и т.д.

Посев на плотные питательные среды (МПА, сусло-агар и др.) в чашках Петри проводят двумя способами: глубинными или «газоном».

При глубинном посеве стерильную питательную среду расплавляют на кипящей водяной бане, затем охлаждают до температуры 40-45 °С и заливают, предварительно внесенной на дно чашки Петри посевной материал, примерно 10 мл среды.

Внесенная среда равномерно перемешивается с посевным материалом, путем осторожного вращения (или покачиванием) чашки на ровной поверхности стола. Чашку оставляют на столе до полного застывания среды, на крышке восковым карандашом или специальными чернилами делают соответствующую надпись. Глубинный посев применяют постоянно для учета микроорганизмов в посевах смывов с различных объектов: сырья, пищевых продуктов, оборудования и т.п. Микробные клетки при глубинном посеве попадают на дно чашки под слой агара, а также на его поверхность. Из клеток образуются колонии разной формы, размера, окраски и т.п., которые затем подсчитываются и изучаются.