Микробиология: Лабораторный практикум, страница 25

В настоящее время в соответствии с требованиями Сан Пин (1997 г.) в молоке и молочных продуктах определяют следующие микробиологические показатели: КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-аэробных микроорганизмов); БГКП (бактерии группы кишечной палочки); КПС (коогулязоположительный стафилококк).

Каждую группу определяют по соответствующей методике КМАФАнМ -методом посева и учета бактерий на МПА с мелом (для выявления молочно­кислых бактерий к основной среде добавляют 2-3% мела).

Метод выявления БГКП в молоке и молочных продуктах основан на способности бактерий кишечной группы сбраживать лактозу в среде Кеслера (см. приложение) с образованием кислоты и газа. По 1 мл. пастеризованного молока засеивают в пробирки с 5мл среды Кеслера и помещают в термостат при 37°С на 24 часа. После чего пробирки просматривают и по наличию в них газообразования предположительно судят о присутствии БГКП. Для идентификации из пробирок, в которых наблюдается брожение проводят посев на диагностическую плотную среду Эндо. Из каждой пробирки с признаками роста делают пересев петлей на поверхность плотной среды. Одну чашку можно использовать для высева одновременно Зх пробирок, разделив дно чашки карандашом на секторы. Посевы на плотных среда проводят таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течении 24 часов, после чего просматривают и отмечают рост колоний характерных для группы БГКП - на среде Эндо колонии плоские или слегка выпуклые или с валиком, бесцветные или красные с различной интенсивностью окраски, с металлическим или без металлического блеска. Из подозрительных колоний делают фиксированные препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсией. При обнаружении грамотрицательных палочек считают, что в продукте присутствуют БГКП. Результат записывают как «обнаружены (не обнаружены) БГКП в анализируемой массе продукта».

При обнаружении бесцветных колоний на чашках со средой Эндо в условиях работы лабораторий, расположенных на территории молочных предприятий, во избежание пропуска патогенных  бактерий семейства кишечных палочек, указанные чашки должны передаваться лаборатории СЭС для дальнейшего изучения.

Для определения присутствия в молоке и продуктах (например сухом молоке) коагулязоположительных (гемолитических) стафилококков делают посев исследуемого продукта обычным способом (раб.6) (с разведением не более 1:10) на диагностические среды: мелочно-солевой агар, или желточно-солевой агар, или МПА с 5-10% дефибринированной крови (бычьей, кроликов и др.). Посевы выращивают в термостате при 37°С в течение 24-28 часов. После 48 часов колонии подсчитывают и делают пересчет на 1 г. или 1 мл. исследуемого продукта. Затем проводят изучение и описание внешнего вида колоний. Колонии, характерные для Staphylococcus aureus на молочно (желточно) солевом агаре выглядят как довольно крупные (2-4 мм в диаметре), плоские, блестящие, окруженные радужной зоной, окрашенные от белого до лимонно-желтого и оранжевого цветов. Фиксированные препараты, приготовленные из колоний окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсией. Стафилококки окрашиваются по Граму положительно (грам +), клетки имеют шарообразную форму и располагаются скоплениями (гроздьями). При выявлении стафилококков в оп­ределенной массе (объеме) продукта результаты записывают как «обнаружены (не обнаружены) стафилококки типа Staphylococcus aureus в анализируемой массе продукта».

Lactobаcillus bulgaricum после культивирования при 40°С в молоке: а) стериальном; б) пастеризованном при 80°С. препараты окрашены метиленовой синью.

Колонии Str. Lactis на агаре с мелом. Видны зоны растворения мела вокруг колоний.