Микробиология: Лабораторный практикум, страница 21

Если на чашке выросло столько колоний, что их трудно подсчитать, то счет модно проводить следующими методами:

По секторам дно чашки расчерчивают карандашом на несколько одинаковых секторов. Затем пересчитывают колонии в 2-3 секторах и среднее число, найденное для одного умножают на количество секторов; Если на чашке с крайним разведением количество колоний подсчитать невозможно, то пользуются счетными камерами. Счетная камера Вольфюгеля представляет собой стеклянную пластину, разделенную на квадраты с площадью 1 см² (Рис. 16).

Опрокинутую вверх дном чашку Петри кладут на стеклянную пластинку и считают число колоний в 10 квадратах, расположенных в 2-х взаимно перпендикулярных направлениях. После того как подсчитано количество колоний в 10 квадратах, выводят среднее число на один квадрат (1 см²).

Для определения количества колоний на поверхности всей чашки число колоний в 1 см² умножают на площадь чашки, равной pr² (для чашки диаметром 10 см радиус = 5 см).

Рис. 14 Автоклавы:

а) вертикальный; б)горизонтальный

Рис. 15 Схема разведений и разливка агара в чашки Петри

Если в одном квадрате подсчитано 30 колоний, то на всей чашке будет 30 х pr² = 30 х 3,14 х 5²= 2355 колоний.

Следует отметить, что наряду с доступностью и относительной достоверностью, метод количественного учета колоний имеет и существенные недостатки, которые следует учитывать при проведении работы.

Прежде всего, исходя из вида исследуемого продукта (свежие овощи, плоды, сырое мясо, рыба, полуфабрикаты, обезвоженные продукты и т.д.) нужно выбрать правильное разведение пробы.

Необходимо тщательное соблюдение правил отбора пробы продукта и проведение смыва стерильной водой. Следует заметить также, что метод позволяет учитывать лишь общее количество определенных групп сапрофитных мезофильных аэробных и факультативно-аэробных микроорганизмов (КМА-ФАНМ), но непригоден для учета анаэробов и некоторых других групп, бактерий.

Кроме метода учета колоний в микробиологической практике на пищевых предприятиях применяется также метод прямого подсчета микроорганизмов под микроскопом. Микробные клетки подсчитывают в счетных камерах разных инструкций: Камера Горяева, Фукс-Розенталя, Тома-Цейса и др. принцип устройства их примерно одинаков (Рис.17).

Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло с нанесенной на ней сеткой. Сетка разделена на определенное число больших и малых квадратов. Постоянной величиной во всех сетках является малый квадрат, сторона которого равна 1/20 мм, площадь его 1/400 мм².

Для определения процентного содержания мертвых клеток дрожжей в прессованных дрожжах, в заквасках, используемых в хлебопечении, в культурах пивоваренных дрожжей и др. берут каплю суспензии дрожжей наносят на сетку камеры подкрашивают метиленовой синей и накрывают покровным стеклом.

Капля под покровным стеклом должна равномерно без пузырьков распределиться по всей сетке. Камеру помещают на предметный столик микроскопа, с объективом 8, находят сетку и не передвигая ее, заменяют объектив 8 объективом 40. через 1-2 мин. подсчитывают число окрашенных (мертвых) и неокрашенных (живых) клеток в 10 полях зрения. Рассчитывают процентное содержание мертвых клеток.

Счетные камеры Горяева используются и для прямого подсчета бактерий, например молочнокислых бактерий в хлебопечении, а также для прямого подсчета в томатопродуктах.

Рис. 16. Счетная камера Вольфгюгеля.