Гемокорректоры. Основные требования к гемокорректорам. Функциональная классификация, страница 17

Для определения резус-фактора применяются два метода:

а) определение резус-фактора с помощью универсального реагента;

б) определение резус-фактора  цоликлоном анти-Д супер.

Определение резус-фактора универсальным реагентом

Оснащение: специально приготовленный универсальный реагент антирезус (Д), стандартные резусположительные и резусотрицательные эритроциты для контроля, пробирки, пипетки Пастера, изотонический раствор хлорида натрия.

Для определения резус-фактора может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием или консервированная без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.

Техника определения: на дно пробирки внести 1 каплю стандартного реагента антирезус и 1 каплю исследуемой крови ( или эритроцитов). Содержимое пробирки перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по её стенкам. Такое размазывание крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной. Как правило, агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген+антитело и чётко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при слабо выраженной агглютинабельности эритроцитов, контакт эритроцитов с реагентом при повёртывании пробирки следует проводить не менее трех минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 5-8 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3-кратного перевертывания пробирки. Оценку производят визуально.

Одновременно с исследованием крови больных или доноров производят контрольное исследование стандартных резусположительных эритроцитов той же группы и стандартных резусотрицательных эритроцитов, обязательно одногруппных с исследуемой кровью.

Оценка результатов: наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветленной жидкости указывает на резусположительную принадлежность исследуемой крови (Rh+).

Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость) указывает на резусотрицательную принадлежность исследуемой крови (Rh-).

Результат учитывается как истинный после проверки контрольных образцов, то есть при положительном результате со стандартными резусположительными эритроцитами и отсутствии агглютинации со стандартными резусотрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью по системе АВО.

Определение резус-фактора цоликлоном анти-Д СУПЕР 

Действующим началом цоликлона анти-Д СУПЕР являются моноклональные человеческие анти-Д антитела, которые продуцируются гетерогибридной, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии и миеломной клеточной линии мыши. Реагент лишен патогенных вирусов (гепатит, СПИД). Анти-Д СУПЕР специфичен по фактору Rh, поэтому может использоваться для выявления Д-антигена в эритроцитах любой группы крови. Анти-Д СУПЕР выпускается в жидкой форме во флаконах объёмом 5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). В качестве консерванта применяется 0,1 % раствор азида натрия. Срок хранения 1 год при температуре +2⁰ С - +8⁰С. вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.

Определение Д-антигена производится в крови, взятой из пальца или из вены.

А) Определение на плоскости.

На пластинку наносят около 0,1 мл реагента, рядом маленькую каплю исследуемой крови (0,01 мл) и капли смешивают. Реакция агглютинации начинает появляться через 60 сек. Результат читают через 3 минуты. Если произошла реакция агглютинации – кровь резусположительная, если нет – резусотрицательная.

Б) Определение в пробирке.   В пробирку вносят 2 капли реагента и 1 каплю 5 % взвеси исследуемых эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. Содержимое пробирки тщательно перемешивают встряхиванием и инкубируют 30-45 минут при комнатной температуре. Пробирку центрифугируют при 1500-2000об/мин в течение 1 минуты, затем, покачивая пробирку, определяют агглютинацию – макро- и микроскопически.