Под титром сыворотки подразумевается её максимальное разведение, в котором сыворотка даёт ещё чёткую агглютинацию. Оптимальный титр сыворотки должен быть не ниже 32, то есть, при разведении в 32 раза, сыворотка даёт чёткую агглютинацию.
Срок годности стандартных, агглютинирующих сывороток равен 4 месяцам. Хранить их необходимо в холодильнике при температуре от +40 до +60С. Кроме того, выпускаются сухие стандартные сыворотки, которые можно хранить при комнатной температуре до 3 лет. После разведения она годна в течение 2 месяцев.
Перед определением группы крови необходимо убедиться в пригодности стандартных гемагглютинирующих сывороток:
а) ампула или флакон не должны иметь трещин, дефектов;
б) ампулой нельзя пользоваться, если нет этикетки;
в) обязательно учитывать данные на этикетке: срок годности, титр сыворотки, серию, групповую принадлежность;
г) в сыворотке не должно быть хлопьев, плёнок, осадка – это признаки инфицирования её.
В настоящее время стандартные сыворотки выпускаются во флаконах с резиновыми пробками, что дает возможность через отверстия в пробке провести глазную пипетку и закрыть флакон, предохраняя сыворотку от высыхания.
Для определения групп крови пользуются специальными белыми плитками, планшетами из молочно-белого стекла или пластмассы, на поверхности которых сделаны углубления для капель крови и сыворотки. Можно пользоваться фаянсовыми белыми или пластмассовыми мелкими тарелками, для этого их маркируют, то есть указывают места для нанесения сывороток каждой группы. Во избежание ошибок тарелки должны быть сухими и чистыми.
Кровь для определения групп крови можно забирать из пальца, уколов в мякоть ногтевой фаланги, или из вен. Из вены берут 3-5 мл в чистую сухую пробирку, без цитрата. После свёртывания крови: образования сгустка, сыворотки, на дне пробирки оседают эритроциты, так называемая третья фракция свёртывания крови, которая и забирается для исследования групп крови. Эту кровь можно использовать для определения резус-фактора и для проведения проб на совместимость. Если кровь хранится в холодильнике при температуре от +40 до +60 С, её можно использовать в течение 3-х суток.
Определение групп крови необходимо производить в помещении с достаточным освещением при температуре от +120С до +250С.
На тарелку согласно маркировке последовательно наносят по 2 капли стандартных сывороток групп крови O(I), A(II), B(III) двух серий. Расстояние между каплями должно быть не менее 4-5 см. Справа от капель сывороток помещают каплю крови, которая должна быть в 5-10 раз меньше капель сывороток. Затем стеклянными палочками перемешивают кровь с сыворотками и засекают время. При покачивании тарелки в течении 3 минут наблюдают появление агглютинации.
Через 3 минуты в каждую каплю смеси добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия. Добавление изотонического раствора хлорида натрия необходимо, для исключения склеивания эритроцитов в монетные столбики, которые могут приниматься за агглютинацию.
Оценка результатов реакции изогемагглютинации
В течении 5 минут может наступить агглютинация, то есть образование комочков эритроцитов, что даёт возможность определить группу крови:
1. Если со стандартными сыворотками агглютинации не наступило, это значит, что эритроциты исследуемой крови не имеют агглютиногенов, и она относится к О (I) группе. 2. Если агглютинация наступила с сывороткой О(I) и B(III) групп и не наступила с сывороткой A(II), то исследуемая кровь – A(II) группы. 3. При наступлении агглютинации с сыворотками O(I) и A(II) групп и отсутствии её с сывороткой B(III) исследуемая кровь – В(III) группы.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.