Химия \ Биохимия

Практикум по биохимии. Часть I. Физико-химические методы: Учебное пособие, страница 6

2. рН-метр.

3. Мерные колбы на 50 мл.

4. Химические стаканы на 50 мл.

5. Пипетки на 1, 5 и 10 мл.

6. Пробирки.

7. 6,6 ×10-5 М раствор цитидина.

8. 0,2 М раствор NaOH.

9. 0,4 М раствор муравьиной кислоты.         

10. 0,1 М раствор НС1.                               

11. Кварцевые кюветы толщиной 1 см

Экспериментальная часть

а) Исходные растворы

Приготовить три буферных раствора (HCOONa–HCOOH) с одинаковой концентрацией формиата натрия (0,1 M) и рН, равным соответственно 3,9; 4,1; 4,3. Для этого в три стакана на 50 мл налить по 25 мл 0,2 М раствора NaOH и оттитровать каждый 0,4 М муравьиной кислотой до соответствующего рН с помощью рН-метра, после чего общий объем каждого раствора довести в мерной колбе до 50 мл дистиллированной водой.

б) Рабочие растворы

Готовят растворы № 1-8 в соответствии с таблицей:

№

Объем (мл) 6,6 10-5  М раствора цитидина

1

кислый

9 мл

+ 1 мл 0,1 М HCl

2

щелочной

9 мл

+ 1 мл 0,1 М NaOH

3

буферный

9 мл

+ 1 мл буфера рН 3,9

4

буферный

9 мл

+ 1 мл буфера рН 4,1

5

буферный

9 мл

+ 1 мл буфера рН 4,3

6

кислый

7 мл

+ 1 мл 0,1 М HCl +

+ 2 мл Н2О

7

кислый

5 мл

+ 1 мл 0,1 М HCl +

+ 4 мл Н2О

8

кислый

3 мл

+ 1 мл 0,1 М HCl +

+ 6 мл Н2О

Контрольные растворы готовятся аналогично, только вместо раствора цитидина берется такое же количество дистиллированной воды.

в) Определение характеристической длины волны

и изобестической точки

Снять спектры поглощения растворов № 1 и 2 относительно контрольных растворов в области 240–310 нм через интервалы в 5 нм. Каждое измерение провести дважды и найти средние значения оптических плотностей. Результаты занести в таблицу и построить график в координатах:

l

№ 1

№ 2

D'

D"

D'

D"

По графику определить характеристическую и изобестическую точки.

г) Проверка закона Бера.

Определение экстинкции протонированного цитидина

Оптическую плотность кислых растворов № 1, 6, 7 и 8 замерить на характеристической длине волны против контрольного раствора, содержащего 9 мл Н2О и 1 мл 0,1 M HCl. Результаты занести в таблицу и построить график в координатах: . Рассчитать по формуле (9) значение .

д) Определение оптической плотности буферных растворов 

 на характеристической длине волны

Оптическую плотность буферных растворов № 3, 4 и 5 замерить трижды на характеристической длине волны против соответствующих контрольных растворов. Среднее значение из трех измерений занести в таблицу и использовать для расчета степени ионизации цитидина.

Обработка результатов

Для буферных растворов № 3, 4 и 5 рассчитать по формуле (26) степень диссоциации a, по формуле (22) ионную силу раствора, по уравнению (21) средний коэффициент активности ионов. Зная значения рН этих растворов, по уравнению (25) определить рКа цитидина. Результаты занести в таблицу:

№ раствора

рН

D

a

pKa

Рассчитать среднюю величину рКа и Ка и сравнить полученные величины с литературными данными.



2. ПОТЕНЦИОМЕТРИЯ

2.1. Область приложений метода

Потенциометрический метод широко используется при изучении ЭДС химических источников тока и состояния электродов, термодинамических свойств твердых, жидких и газовых растворов, коэффициентов активности компонентов, констант равновесия химических реакций, абсолютных скоростей движения ионов в растворах (чисел переноса), а также при решении различных аналитических задач.

Скачать файл