Органическая химия: Лабораторный практикум, страница 34

Опыт № 100. Образование биурета (реакция на пептидную связь)

Реактивы:

Раствор яичного белка

Раствор сульфата меди

Раствор гидроксида натрия

Ход работы:

В пробирку наливают ~1 мл раствора яичного белка, добавляют с помощью пипетки ~2 капли раствора гидроксида натрия и ~1 каплю раствора сульфата меди. Наблюдается появление розовато-фиолетовой окраски.

Опыт № 101. Ксантопротеиновая реакция (на наличие ароматических аминокислот)

Реактивы:

Раствор яичного белка

Концентрированная азотная кислота

Ход работы:

В пробирку наливают ~1 мл раствора яичного белка, добавляют ~0,5 мл концентрированной азотной кислоты и нагревают до кипения. Образуется сгусток желто-оранжевого цвета.

Опыт № 102. Реакция на аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу

Реактивы:

Раствор яичного белка

Раствор 30%-ного гидроксида натрия

Раствор ацетата свинца (II)

Ход работы:

В пробирку наливают ~1 мл раствора яичного белка, добавляют такой же объем 30%-ного раствора гидроксида натрия и нагревают до кипения. Затем к горячему раствору добавляют ~1 мл ацетата свинца и кипятят. В результате гидролиза происходит отщепление серы в виде сульфида натрия, который с плюмбитом дает черный или бурый нерастворимый осадок сульфида свинца. Реакция протекает в соответствии с уравнениями:

                  CH₂-CH-COOH   +   2NaOH   ®   CH₂-CH-COOH   +   Na₂S

                  ½      ½                                               |        ½  

               HS      NH₂                                       HO      NH₂

                  цистеин                                                     серин

          (СН₃СОО)₂Pb + 4 NaOH ® Na₂PbO₂ + CH₃COONa + 2 H₂O                              

                  Na₂S  +  Na₂PbO₂  +  2H₂O   ®   PbS¯  +  4NaOH

Опыт № 103. Высаливание белков

Реактивы:

Концентрированный яичный белок

Насыщенный раствор сульфата аммония

Ход работы:

К ~3 мл неразведенного яичного белка добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония и перемешивают. Получается полунасыщенный раствор сульфата аммония, в котором выпадает осадок яичного глобулина. Через ~5 мин осадок отфильтровывают. В фильтрате остается другой белок – яичный альбумин.

Для высаливания альбуминов к фильтрату добавляют измельченный порошок сульфата аммония до полного насыщения, т.е. до тех пор пока новая порция порошка остается нерастворенной. Выпавший осадок альбумина отфильтровывают. С фильтратом проводят биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка (т.е. белки разделены и выделены).

Выделенные альбумин и глобулин поочередно растворяют, с растворами проводят биуретовую реакцию, ксантопротеиновую, реакцию Миллона, реакцию на наличие серы.