При восстановлении раствора рибофлавина гидросульфитом натрия происходит химическое гашение флуоресценции из – за превращения рибофлавина в бесцветное соединение.
Гашение флуоресценции при восстановлении рибофлавина используется при анализе его растворов, содержащих флуоресцеирующие примеси. Вначале измеряют суммарную интенсивность флуоресценции раствора, и после гашения свечения рибофлавина восстановлением NaHSO3 измеряют остаточное свечение примесей; по разности общего и остаточного свечения определяют свечение рибофлавина.
Количественное определение витамина В2 заключается в построении с помощью стандартных растворов градуировочной кривой в координатах: содержание рибофлавина в мкг (ось абсцисс) - интенсивность флуоресценции (ось ординат).
После определения по графику содержания рибофлавина в исследуемом растворе его проверяют на присутствие примесей путем гашения свечения рибофлавина гидросульфитом натрия и измерение остаточной флуоресценции.
Y
С
Используемый в Концентрационное гаше -
анализе диапазон ние
флуоресценции
концентраций (при больших
концентрациях)
от 10-4 до 10-7 
Кривая зависимости интенсивности
флуоресценции от концентрации вещества.
Выполнение работы
Приготовление стандартных растворов
1.Отбирают мерной пипеткой 20 см3 раствора №1, содержащего 20 мкг рибофлавина в 1 см3, помещают в мерную колбу на 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Исходный раствор №2 содержит 4 мкг/см3 рибофлавина.
2. Для приготовления стандартных растворов в 4 мерные колбы на 100 см3 бюреткой отмеривают порции раствора №2 и доводят до метки дистиллированной водой:
|
№ колбы |
Раствор в см3 |
Содержание рибофлавина в мкг/см3 |
|
1 |
5,0 |
0,2 |
|
2 |
10,0 |
0,4 |
|
3 |
15,0 |
0,6 |
|
4 |
20,0 |
0,8 |
|
5 контрольный раствор |
х |
х выдает преподаватель |
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.