РГадс используют для раннего обнаружения вирусов в КК.
┌──────────┐ ┌──────────┐
│ │ │ │
│ │ РГадс │ │
│ │ │ │
└──────────┘ └──────────┘
Положительная Отрицательная
4.Образование бляшек - феномен Дюльбекко.
┌──────────┐ Принцип метода: монослой клеток после заражения
│ │ вирусом заливают слоем полужидкого агара, в сос│ │ тав которого входит питательная среда и краси│ │ тель нейтральный красный.
└──────────┘ В тех зонах монослоя, где происходит размножение цитопатического вируса, группы дегенерированных клеток не окрашиваются и выглядят на розовом фоне прозрачными пятнами.
5.Феномен интерференции.
Принцип метода: феномен интерференции используется для обнаружения вирусов, не дающих отчетливого ЦПД в культуре клеток. Исследуемую культуру повторно заражают вирусом,регулярно вызывающим ЦПД.
Индикаторным является ВВС- вирус везикулярного стоматита. При наличии в исследуемом материале вируса ЦПД у индикаторного ВВС будет отсутствовать (клетка "занята" исследуемым вирусом). Оценка визуальная или при малом увеличении микроскопа.
Определение инфекционной активности вирусов (титрование).
I этап.Разведение вируссодержащего материала в питательной среде или физиологическом растворе.
II этап.Мерный перенос материала в: а)пробирки с культурой клеток;
б)куриный эмбрион; в)в организм животного.
III этап.Добавление эритроцитов или других ингредиентов (в зависимости от используемого феномена).
IV этап.Учет результатов: титр вируса - максимальное разведение вируссодержащего материала, в котором еще наблюдается ожидаемый эффект (ЦПД, РГА, гибель животного).
Титр соответствует 1 единице. Титрование необходимо для выбора рабочей дозы вируса, которая в дальнейшем будет использована для постановки иммунологических реакций с целью идентификации вируса.
Общая схема идентификации (серотипирования) выделенного вируса.
I этап.Выделенный вирус в рабочей дозе смешивается с диагностической противовирусной сывороткой в рабочем разведении - контакт при комнатной температуре или t 37C 1 час.
II этап.Перенос инкубированной смеси в: а)культуру клеток; б)организм животного; в)куриный эмбрион.
III этап.Добавление взвеси куриных эритроцитов. Возможно использование других феноменов индикации действия вируса.
IV этап.Учет результатов.
Вид (тип) вируса определяется по нейтрализующему действию специфического эффекта вируса одной из иммунных сывороток.
Выделение, титрование и идентификация вируса проводятся с использованием одного и того же феномена. Метод относится к ранним высокочувствительным методам исследования.
Недостатки: сложность интерпретации результатов при выделении персистирующих вирусов; технические сложности.
Лабораторные животные.
Используют преимущественно новорожденных белых мышей, хомяков, морских свинок, крысят. Заражение животных проводится по принципу цитотропизма вируса: пневмотропные вирусы вводятся интраназально, нейротропные вводятся интрацеребрально, дерматотропные - на кожу.
Индикация вируса основана на проявлении признаков заболевания у животных, их гибели, патоморфологических изменениях в тканях и органах, а также на положительной реакции гемагглютинации с экстрактами из органов.
III.СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД. Определяет нарастание титра (прирост антител) за определенный период заболевания в парных сыворотках больных или переболевших людей с помощью набора вирусных диагностикумов.
Парные сыворотки - две сыворотки, взятые от одного больного в начале заболевания и через 1-4 недели. Серологические реакции
(РПГА, РСК, РТГА, РН, ИФА и др.) ставят одновременно с двумя сыворотками для определения и сравнения их титров.
Для ранней диагностики заболевания определяют наличие IgM в одной сыворотке (в непрямой ИФ или ИФА).
Принципы иммунопрофилактики вирусных инфекций.
Наиболее эффективным средством иммунопрофилактики вирусных инфекций является вакцинация.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.