а)определение вирусного антигена в исследуемом материале с помощью диагностических противовирусных сывороток в экспресс-реакциях: иммунофлюоресценция (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА), встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ), иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), реакция прямой и обратной пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция торможения обратной пассивной гемагглютинации;
б)микроскопический метод - обнаружение элементарных частиц или включений вирусов с помощью световой, люминесцентной или электронной микроскопий;
┌───────────────┐ Тельца Бабеша-Негри в срезе гиппокампа.
│ │ Окраска по Муромцеву.
└───────────────┘ Ув. х в)молекулярная гибридизация - гибридизация комплементарных нитей
ДНК или РНК (вируса и зонда). Зонд (ДНК, РНК, и-РНК, рекомбинантная ДНК) мечен радиоактивным предшественником или ферментом. Выявление степени гибридизации по радиоактивности или колориметрически.
II.ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА 0 основана ______________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
Основные этапы вирусологического метода:
1. Забор исследуемого материала.
2. Выбор и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности.
3. Заражение ее по принципу цитотропизма.
4. Индикация вируса на основании обнаружения его нуклеиновой кислоты, гемагглютинина, ЦПД, включении, интерферона, антигенов.
5. Идентификация и титрование вируса проводится на основании:
а) определения антигенов вируса в тест-системе с помощью серологических реакций (РИФ, ИФА, РПГА, РСК, РН, ВИЭФ и др.).
б) патогистологического исследования органов и тканей.
в) ЦПД.
г) клинических симптомов, биологических проб (кератоконьюнктивальная и другие).
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ.
Вирусы - облигатные внутриклеточные паразиты, не способные размножаться ни в одной из бесклеточных сред.
Для их культивирования используются: 1) куриные эмбрионы;
2) культуры клеток (тканей, органов); 3) лабораторные животные.
КУРИНЫЙ ЭМБРИОН (КЭ).
Строение куриного эмбриона
(обозначьте на рис. структурные элементы КЭ)
а) аллантоисная полость;
б) амнион;
в) желточный мешок.
МЕТОДЫ ЗАРАЖЕНИЯ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ.
1.Для заражения отбирают 7-12 дневные эмбрионы с выраженными кровеносными сосудами, желточным мешком и подвижной тенью.
2.Перед заражением скорлупу обрабатывают спиртом,обжигают и в области введения смазывают 2% йодной настойкой.
3.Материал вводят, вскрывая или не вскрывая скорлупу, в желточный мешок, на ХАО, в аллантоисную, амниотическую полости, тело эмбриона или внутривенно.
4.Отверстие в скорлупе парафинируют.
5.Эмбрионы инкубируют во влажной атмосфере острым концом вниз.
6.Инфицированные эмбрионы регулярно просматривают под овоскопом, обращая внимание на инъекцию сосудов, потерю подвижности и др.
признаки.
7.При вскрытии эмбрионов скорлупу обрабатывают спиртом и йодной настойкой, срезают ее выше границы воздушного мешка.
8.Пастеровской пипеткой или шприцем отсасывают сначала аллантоисную, а затем амниотическую жидкости, избегая повреждения сосудов и желточного мешка.
9.Эмбрион и ХАО извлекают из скорлупы, помещают в стерильные чашки, промывают водой и осматривают.
10.Дальнейший ход исследования эмбриона и его жидкостей зависит от целей опыта.
ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КЭ.
1._______________________________________________________________
2._______________________________________________________________
3._______________________________________________________________
4._______________________________________________________________
5._______________________________________________________________
А. РГА с алантоисной жидкостью куриных эмбрионов, зараженных вирусом гриппа.
Принцип метода __________________________________________________
_________________________________________________________________
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.