Исследуемый материал ____________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции ______________________________
┌─────────────┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────────────────────┐
│Развед.вируса│1/2│1/4│1/8│1/16│1/32│1/64│контроль эритроцитов│
├─────────────┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────────────────────┤
│ 1 кап. взвеси КЭ │
├─────────────┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────────────────────┤
│Результат │ │ │ │ │ │ │ │
└─────────────┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────────────────────┘
Вывод: __________________________________________________________
КУЛЬТУРА КЛЕТОК.
Наибольшее распространение имеют однослойные культуры клеток.
Все культуры однослойных клеток можно разделить на первичные и перевиваемые.
Первичные культуры клеток - это клетки различного типа (почек обезьян,почек эмбриона человека, амниона человека, куриных эмбрионов), которые получают следующим образом: взятую ткань (эмбриональную или взрослых организмов) механически измельчают и обрабатывают ее протеолитическими ферментами (трипсином). После отмывки и подсчета клеток суспензию разбавляют питательной средой и дают возможность клеткам прикрепиться к плоской поверхности стеклянных или пластмассовых сосудов. В результате деления клеток на поверхности сосудов образуется сплошной монослой клеток. Срок жизни таких культур ограничен.
Лишь отдельные группы клеток первичных культур могут сохранить способность к росту и размножению и при многократных перевивках они дают начало перевиваемым культурам клеток.
Перевиваемые культуры клеток делят на перевиваемые линии клеток и перевиваемые штаммы клеток.
Перевиваемые клеточные линии характеризуются потенциальным бессмертием и гетероплоидным кариотипом.
Перевиваемые штаммы клеток (полуперевиваемые культуры клеток, диплоидные)- клетки одного типа, способные in vitro выдерживать до
100 пассажей, сохраняя при этом свой исходный диплоидный набор хромосом.
Источником перевиваемых линий и штаммов клеток являются первичные клеточные культуры, отдельные клетки которых обнаруживают способность к бесконечному размножению in vitro, а также клетки злокачественных новообразований. В последнем случае трансформация клеток происходит уже in vivo. Наиболее часто в вирусологической практике применяются такие линии перевиваемых клеток как Hela получена из карциномы шейки матки; Hep-2- из карциномы гортани;
Детройт-6- из метастаза рака легкого в костный мозг; RH- из почки человека; ВНК-21- из почек однодневных сирийских хомяков; ПМС из почки морской свинки и др.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И СОЛЕВЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ КУЛЬТУР КЛЕТОК.
Солевые растворы. По набору солей качественно и количественно приближаются к составу жидкостей организма, создают буферность и изотоничность среды. Применяются для промывки тканей и клеток в процессе приготовления клеточных культур и для приготовления питательных сред.
Питательные среды. По своему назначению питательные среды делятся на:
а)ростовые- содержат питательные вещества,обеспечивающие активное размножение клеток, формирование монослоя на поверхности стекла.
Имеют сложный состав с обязательным включением сыворотки или крови животных.
б)поддерживающие- обеспечивают переживание клеток в уже сформировавшемся монослое при размножении в клетках вирусов.Не содержат сыворотки животных.
Широкое применение находят синтетические стандартные среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. Неотъемлемым компонентом большинства ростовых сред является сыворотка крови животных (телячья, бычья, лошадиная).
Мероприятия при работе с культурами клеток.
1.Бактериологический контроль.
2.Контроль на вирусологическую стерильность.
3.Цитогенетический контроль (характеристика хромосомного аппарата).
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.