Лабораторный практикум для студентов технологических специальностей, страница 51

Перемещение голубого кольца декстрана вниз по колонке хорошозаметно. Весь процесс разделения смеси полисахарид – нитрат кобальта при заданной скорости элюирования занимает 40-50 мин, за которые в коллектор собирается 15 фракций, т.е. 1 фракция за 3 минуты.

Каждую из фракций анализируют спектрофотометрически на присутствие полисахарида, и кондуктометрически на присутствие нитрата кобальта. 

Спектрометрический анализ полисахарида на спектрофотометре

Включают прибор и выдерживают его 3 минуты для выравнивания силы тока до 300 микроампер, затем включают излучающую водородную лампу и дожидаются загорания (со щелчком). Затем открывают крышку кюветодержателя (объектив фотоэлемента закрыт), поворачивают рукоятку видов работ в положение “on” – “включено” (положение “off” – “выключено”) и выдерживают 10 минут. Рукояткой регулировки длины волны “wavelength” – устанавливают соответствующий образцу узкий интервал со значением “λ” = 280 нм. Выдвижными ручками регулируют установку системы из двух фотоэлементов (одного для УФ – диапазона, другого для видимого ИК диапазона). Рукояткой “Durk-current” стабилизируют ультрафиолетовое излучение выбранного диапазона (“темновой” ток), фиксируя стрелку нуль прибора в среднем положении. Затем измеряют оптическую плотность “D” раствора. Кювету с растворителем помещают в кюветодержатель, закрывают его крышку (объектив фотоэлемента открыт дляизмерения). Рукоятку видов работ переключают из положения “on” в положение “ x I”, а рукоятку отсчета “reading” в положение ноль. Рукояткой “щель” – “slit” (узкая полоса диапазона) вначале грубо переводят стрелку нуль – прибора в положение 0, а рукояткой чувствительности производят точную доводку стрелки шкалы до 0, снимая после этого со шкалы отсчета “reading” значение оптической плотности “D” образца. Затем последовательно анализируют фракции элюента из колонки и строят график изменения оптической плотности  “D” (полисахарид) в ходе хроматографирования, откладывая на оси абсцисс номера фракции, а на оси ординат – оптическую плотность “D” (рис. 18). Из графика следует, что вещество, поглощающее ультрафиолетовое излучение с длиной волны “λ”  = 280 нм, содержится во фракциях с №6 по №10.

Кондуктометрический анализ нитрата кобальта на кондуктометре ОК – 102/1.

Из – за чувствительности прибора к присутствию сильных электролитов электрод, состоящий из двух проводников – электродов, должен быть очищен от следов электролитов промыванием в дистиллированной воде. Затем измеряют поочередно электропроводность хроматографических фракций с разным содержанием нитрата кобальта и строят график (рис. 18).

Рис. 18.  Совмещенные графики оптической плотности и электропроводности (пунктиром) серии хроматографических фракций

Из графика следует, что фракции № 1 – 4 содержат чистый растворитель, фракции № 5 – 8 содержат лишь полисахарид, фракции № 10 – 12 содержат лишь Co(NO3)2, фракция № 9 содержит смесь обеих веществ (неполнота разделения). 

Вопросы для самопроверки:

1.  На чем основана классификация оптических методов анализа. Оптическая схема фотоэлектроколориметра.

2.  Что такое оптическая плотность раствора, от каких факторов она зависит.

3.  Привести объединенный закон Бугера-Ламберта-Бера. Чем объяснить отклонения от этого закона.

4.  Эмиссионные методы анализа. Классификация.

5.  Сущность спектрального метода анализа.

6.  Пламенно-фотометрический метод анализа. Почему он может быть использован только для анализа щелочных и щелочно-земельных элементов.

7.  Сущность люминесцентного метода анализа. Классификация.

9.  В чем заключается «Стоксово смещение».

10.    В каких пределах находится линейный диапазон концентраций при флуориметрическом анализе.

11.  Чем вызвано концентрационное гашение флуоресценции.