Лабораторный практикум для студентов технологических специальностей, страница 45

При восстановлении раствора рибофлавина гидросульфитом натрия происходит химическое гашение флуоресценции из – за превращения рибофлавина в бесцветное соединение.

Гашение флуоресценции при восстановлении рибофлавина используется при анализе его растворов, содержащих флуоресцеирующие примеси. Вначале измеряют суммарную интенсивность флуоресценции раствора, и после гашения свечения рибофлавина восстановлением NaHSO3 измеряют остаточное свечение примесей; по разности общего и остаточного свечения определяют свечение рибофлавина.

Количественное определение витамина В2 заключается в построении с помощью стандартных растворов градуировочной кривой в координатах: содержание рибофлавина в мкг (ось абсцисс) - интенсивность флуоресценции (ось ординат).

После определения по графику содержания рибофлавина в исследуемом растворе его проверяют на присутствие примесей путем гашения свечения рибофлавина гидросульфитом натрия и измерение остаточной флуоресценции.

        Y

 

 

                                                                                                                     С

Используемый в                                               Концентрационное гаше -                                                                                                                                                                              

анализе диапазон                                              ние                                                           

                                                                                           флуоресценции

концентраций                                                 (при больших

                                                                          концентрациях)        

от 10-4 до 10-7

Рис. 14

Кривая зависимости интенсивности

флуоресценции от концентрации вещества.

Выполнение работы

Построение градуировочной кривой

Приготовление стандартных  растворов

1.Отбирают мерной пипеткой 20 см3 раствора №1, содержащего 20 мкг рибофлавина в 1 см3, помещают в мерную колбу на 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Исходный раствор №2 содержит 4 мкг/см3 рибофлавина.

2.  Для приготовления стандартных растворов в 4 мерные колбы на 100 см3 бюреткой отмеривают порции раствора №2 и доводят до метки дистиллированной водой:

№ колбы

Раствор в см3

Содержание рибофлавина в мкг/см3

1

5,0

0,2

2

10,0

0,4

3

15,0

0,6

4

20,0

0,8

5

контрольный раствор

х

х

выдает преподаватель