Пластинчатая агглютинация.
Пластинчатая реакция агглютинации ставится на гладкой поверхности стекла, фарфора. Поверхность пластинки должна быть тщательно обезжирена, чтобы хорошо растекалась капля сыворотки, физиологического раствора.
Реакция применяется: 1) для серологической идентификации микробов на этапах бактериологического исследования и для окончательной серологической идентификации выделенных культур микробов кишечного семейства с помощью поливалентных и монорецепторных сывороток; 2) для ускоренной серологической диагностики инфекционных болезней путем обнаружения антител, например при бруцеллезе (реакция Хеддльсона), туляремии.
Агглютинация на стекле относится к методам экспресс диагностики. V-антиген и иммунную сыворотку берут высококонцентрированными и взаимодействие между ними происходит при регулярном покачивании. Реакция наступает быстро, через несколько минут, что выгодно отличает ее от реакции в пробирках.
Для постановки пластинчатой реакции на стекло наносят каплю цельной или слегка разведенной иммунной сыворотки, к ней добавляют каплю концентрированного антигена, в виде живой культуры, капли перемешивают петлей или легким покачиванием стекла. При положительном результате уже через несколько минут жидкость в капле просветляется, а по краям появляются хлопья склеившихся бактерий. Реакция сопровождается контролем антигена и антитела.
Существуют и другие варианты постановки реакции агглютинации: капельный, микроскопический, ускоренный по Ноблю.
Непрямая агглютинация.
Реакция агглютинации отличается высокой чувствительностью. Она положительна даже при содержании 0,1-0,01 мг антител в 1 мл. Чувствительность этой реакции может быть повышена, если увеличить массу и объем реагентов, адсорбируя их на поверхности инертных носителей. Носителями антигена или антител могут быть естественные клетки: эритроциты, лейкоциты, бактериальные клетки, а также созданные искусственно: латекс, полистирол, бентонит, частицы угля. Основное требование, предъявляемое к носителям - возможность прочно соединяться с молекулами антигена или антитела и не давать спонтанной агглютинации. Такая реакция агглютинации называется непрямой агглютинацией. Различают несколько модификаций непрямой агглютинации:
а) Непрямая или пассивная агглютинация (РНГА, РПГА)
Носителем антигена или антител в этой реакции служат эритроциты. Нативные эритроциты животных (барана, обезьяны, морской свинки), птиц (петуха, гуся), человека 1 группы обладают способностью адсорбировать на своей поверхности полисахаридные молекулы, в том числе полисахаридные антигены бактерий, без предварительной обработки эритроцитов. Если же эритроциты обработать танином или трипсином, то на их поверхности будут адсорбироваться белковые молекулы, в том числе антитела, белковые антигены. Так как в лабораторных условиях обработка свежих эритроцитов представляет определенные трудности, разработана методика сенсибилизации формалинизированных эритроцитов очищенными растворимыми антигенами микробных клеток или гамма-глобулиновой фракцией иммунной сыворотки. Эти препараты получили название эритроцитарных диагностикумов. Эритроцитарные диагностикумы являются стабильными препаратами и работа с ними упрощена. Реакция непрямой гемагглютинации используется для обнаружения антител в исследуемой сыворотке, которую разводят и разливают в лунки плексигласовой панели. Туда же добавляют равный объем соответствующего эритроцитарного диагностикума. Постановка реакции сопровождается контролями. Учет проводят после двух часовой экспозиции. Если антитела соответствуют антигену, они взаимодействуют между собой, внешним проявлением будет агглютинация эритроцитов, которая выглядит в виде рыхлого осадка с фестончатыми краями, занимающего большую часть дна лунки – «зонтик». Если же реакция отрицательная, то осадок эритроцитов имеет вид плотного диска в центре лунки с ровными краями – «пуговка».
Кроме того, реакция непрямой гемагглютинации может быть использована дня обнаружения растворимых антигенов с помощью известных антител, адсорбированых на поверхности эритроцитов.
РНГА по своей чувствительности и специфичности превосходит многие другие серологические реакции.
б) Латекс-агглютинация
Латекс-агглютинация - это реакция, в которой в качестве известного носителя используются частицы латекса. Латекс – водный раствор млечного сока каучуконосных деревьев или синтетических каучуков. Частицы латекса нагружают молекулами антигена или антитела и они приобретают способность склеиваться соответствующими антителами или антигенами. Если на латексе адсорбированы растворимые антигены, то эти частицы используются для обнаружения антител в исследуемой сыворотке и наоборот, если на латексе адсорбированы антитела, то частицы используют для обнаружения антигена. Чаще всего, метод используется для определения ревматоидного фактора или HBs-антигена.
Ставят реакцию на стекле, смешивая нагруженный антителами латекс и исследуемый антиген, при положительной реакции уже через 5 - 10 минут образуются видимые невооруженным глазом агглютинаты, которые затем увеличиваются в размере.
в) Реакция коагглютинации
В реакции коагглютинации в качестве инертного носителя используется культура золотистого стафилококка (штамм CowanI). Белок А, находящийся на поверхности оболочки этого стафилококка, способен связывать Fc-фрагмент иммуноглобулина G (Ig G1, G2, G4) оставляя свободными активные центры антитела. Эти центры взаимодействуют с соответствующими антигенами, вызывая склеивание стафилококков. Реакция применяется для обнаружения и типирования корпускупярных и растворимых антигенов. Для постановки реакции выпускают коммерческие стафилококковые реагенты (т.е. стафилококки нагруженные антителами диагностических иммунных сывороток). К реагенту добавляют 0,01 - 0,1 мл выделенной культуры, перемешивают покачиванием стекла и через 10 - 30 минут инкубации при комнатной температуре учитывают как обычную реакцию агглютинации.
ЗАНЯТИЕ 24
ТЕМА: РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.