Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 16

Токсин в мл	0,10	0,15	0,20	0,25	0,30
Стандартная сыворотка в мл	1	1	1	1	1
День гибели		4-е сутки

Limes tod = 0,15

2 этап – опытную смертельную дозу токсина соединяют с различными количествами испытуемой сыворотки (разведенной), смеси вводят морским свинкам и вновь наблюдают гибель одной из морских свинок на 4-е сутки.

Таблица 9. Определение титра сыворотки.

Токсин	0,15	0,15	0,15	0,15	0,15
Испытуемая сыворотка 1:100 в мл	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5
День гибели		4-е сутки

 Следовательно: 0,2 мл – 1 МЕ

                             1,0 мл – 5 МЕ, а титр сыворотки 5х100=500 МЕ

          При постановке реакции в организме можно предварительно опытному животному ввести антитоксическую сыворотку, а потом ввести оттитрованную дозу токсина. Контрольному животному вводят только токсин и оно погибает, так как в организме нет антител.

          Вариантом постановки реакции нейтрализации в организме является определение уровня антитоксического иммунитета путем постановки внутрикожных проб с токсином (пробы Шика, Дика и др.).

          Нейтрализация токсина антитоксином может быть определена в чашках Петри методом преципитации в геле. Эта модификация используется для обнаружения токсигенности культур дифтерийных палочек, стафилококков и др. Токсигенность выявляют по линиям преципитации, которые появляются в агаре в результате взаимодействия токсина, образуемого исследуемой культурой и диффундирующего в агар и антитоксина, также диффундирующего в агар из места его нанесения.

          Присутствие токсина, а также его силу можно определить пробирочным методом в реакции флоккуляции.

Методические указания к демонстрации

Реакция флоккуляции

Реакция флоккуляции основана на способности смеси токсина с антитоксической сывороткой в определенных условиях опыта давать помутнение и выпадать в осадок. Реакция была предложена Рамоном. Основным условием для визуального проявления реакции является эквивалентные соотношения антигена и антитела. Раньше всего реакция наступает там, где количество единиц токсина соответствует количеству единиц антитоксина. Примечательным является также и то, что реакция флоккуляции произойдет, если в качестве антигена используется и анатоксин. Анатоксин – это обезвреженный токсин, который получают из экзотоксина путем обработки его 0,3 – 0,4% раствором формалина при температуре 37-40°С в течение 18-30 дней. В результате такой обработки токсин теряет свои ядовитые свойства, но сохраняет антигенные. Сила анатоксина измеряется в антигенных единицах связывания (ЕС). Реакция флоккуляции используется в вакцинном производстве для титрования анатоксина или антитоксической сыворотки.

          Для титрования полученный анатоксин разливают в пробирки по 2 мл, в каждую пробирку добавляют стандартную антитоксическую сыворотку в определенной дозе и определенной силы от 0,2 до 1,6 мл (например: противодифтерийная сыворотка с титром 1000 АЕ, разведение 1:10). Смесь помещают на водяную баню при 45°С на 40-45 мин и наблюдают, в какой из пробирок произойдет инициальная или начинающаяся флоккуляция.

Таблица 10. Схема реакции флоккуляции.

№№ пробирок	1	2	3	4	5	6
Анатоксин	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0
Антитоксическая противодифтерийная сыворотка, т. 1000 АЕ, разв.	0,2	0,4	0,6	0,8	1,0	1,2
			инициальная или начинающаяся флоккуляция

Например: инициальная флоккуляция произошла в пробирке №3.

Силу анатоксина вычисляем следующим образом: для связывания 2 мл анатоксина потребовалось 60 МЕ сыворотки (1 мл сыворотки содержит 100 АЕ, 0,6 мл содержат 60 АЕ), на 1 мл – х, составляем пропорцию:

2,0 – 60 АЕ

1,0 – х                              х=60:2=30 АЕ

          Вывод: в 1 мл анатоксина содержится 30 ИЕ. За 1 ИЕ (иммуногенную единицу) или ЕС принимают то количество анатоксина, которое в смеси с 1 АЕ сыворотки дает инициальную флоккуляцию.

          Реакция флокуляции применяется и для определения титра антитоксической сыворотки.

Таблица 11. Определение титра антитоксической сыворотки в реакции флоккуляции.

№№ пробирок	1	2	3	4	5
Антитоксическая противодифтерийная сыворотка	0,1	0,15	0,2	0,25	0,3
Дифтерийный анатоксин, т 50 ИЕ	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0

Водяная баня при 45°С в течение 40-45 мин

Например: инициальная флоккуляция произошла в пробирке №4.

На связывание 0,25 мл антитоксической сыворотки пошло 100 ИЕ анатоксина, составляем пропорцию:

0,25 – 100 ИЕ

1,0 – х                     х=100:0,25=400 АЕ

Вывод: титр антитоксической сыворотки 400 АЕ.

ЗАНЯТИЕ 28

ТЕМА: Т- И В-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ КЛЕТОК ПРИ РЕАЛИЗАЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА. ХАРАКТЕРИСТИКА ТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО ИММУНИТЕТА. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА

Цель занятия: Ознакомить студентов с клеточной и гуморальной разновидностями иммунной системы. Изучить взаимодействие клеток при иммунном ответе. Освоить понятие «трансплантационный иммунитет» и научиться оценивать иммунный статус. 

План занятия

1.  Характеристика центральных и периферических органов иммунитета

2.  Иммунокомпетентные клетки, их генез и основные функции

3.  Взаимодействие клеток при реализации иммунного ответа (макрофаг, Т-лимфоцит, В-лимфоцит)

4.  Медиаторы иммунного ответа

5.  Иммунологическая толерантность

6.  Понятие о трансплантационном иммунитете

7.  Методы оценки гуморального иммунитета (В-системы)