Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 13

Связывание фермента с белком необходимо внимательно контролировать, так как могут быть неправильные молярные соотношения и активность антител снижена. Наиболее четкие результаты получают, если оптическую плотность окрашенного раствора определяют в спектрофотометре.

Преимуществом метода является отсутствие контакта с радиоактивными веществами.

В настоящее время метод ИФА очень широко применяется в различных отраслях медицины. Широко им пользуются в вирусологии для выявления вирусных антигенов или антител к вирусам. Разработаны тест-системы ИФА для выявления стафилококковых энтеротоксинов, дифтерийного токсина, антител к пневмококку и т.д.

ЗАНЯТИЕ 26

ТЕМА: РЕАКЦИЯ ИММУННОГО ЛИЗИСА: БАКТЕРИОЛИЗА, ГЕМОЛИЗА. РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)

Цель занятия: изучить сущность реакции иммунного лизиса, ее модификации. Изучить сущность РСК. Методы постановки этих реакций, практическое применение, оценки

План занятия

1.  Реакция бактериолиза (феномен Исаева-Пфейффера)

2.  Реакция гемолиза, характеристика компонентов, практическое использование

3.  РСК, характеристика компонентов, участвующих в РСК, практическое использование

Реакция иммунного лизиса

Реакция иммунного лизиса основана на способности живых клеток, соединенных с соответствующими антителами сыворотки раз­рушаться и растворяться в присутствии комплемента.

         В зависимости от вида клеток, участвующих в реакции различают варианты реакции лизиса:

Схема 10

                                                                                                           Реакция иммунного лизиса

 

Разновидности реакции                                             Бактериолиз                                                         Гемолиз

  

Компоненты реакции        Антиген       Антитело        Дополнительный         Антиген      Антитело        Дополнительный

                                                                                                  фактор                                                                         фактор

 

Характеристика                  Живые    Бактериолизины   Комплемент             Эритроцит  Гемолизины          Комплемент

компонентов                     бактерии

 

Способы постановки        В организме     В пробирке                                                          В пробирке

Цель постановки                   Выявление антигена или антитела                                    Индикаторная системы в РСК

Механизм                     К комплексу антиген+антитело присоединяется комплемент в последовательности:

                                       С1+С4+С2+С3+С5+………С9, что приводит к повреждению стенки бактерий или

                                       мембраны эритроцитов и их лизису                   

Схема 11

                                                                                         Реакция связывания комплемента              

 

Компоненты реакции                 Антиген                     Антитело                       Комплемент               Индикаторная система

Характеристика              Гаптены                         Сыворотка больного     Сыворотка морской           Равные объемы 3%

компонентов                   Белки                              Иммунная сыворотка   свинки в рабочей дозе       взвеси эритроцитов

                                         Экстракты тканей                                                                                              и гемолитической

                                         Вирусы                                                                                                                сыворотки в рабочем

                                         Продукты распада                                                                                              титре

                                         микробных клеток

 

Цель постановки                                                             Выявление антител и антигенов

Механизмы          К образовавшемуся комплексу антиген+антитело присоединяется комплемент – гемолиза не будет,

                                                                                      реакция ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ

                              При отсутствии комплекса, комплемент реагирует с гемолитической системой, наступит гемолиз,

                                                                                      реакция ОТРИЦАТЕЛЬНАЯ

а) Реакция бактериолиза, которая основана на способности живых бактерий, соединенных с гомологичными антителами растворяться в присутствии комплемента. В качестве антигена используются живые бактерии (вибрионы, спирохеты). Антитела – лизины содержатся иммунной диагностической сыворотке или сыворотке больного. В качестве комплемента используется свежее взятая или консервированная сыворотка крови морской свинки.

Бактериолиз как иммунобиологический процесс наиболее ярко выражен при холере и тифо-паратифозных заболеваниях, а также при спирохетозах.

Реакция бактериолиза может быть поставлена для определения вида холерного вибриона как в организме (феномен Исаева-Пфейффера) так и в пробирке.  

Для постановки реакции в организме берут двух морских сви­нок. Одной вводят внутрибрюшинно смесь исследуемой живой культу­ры вибриона с соответствующей иммунной сывороткой, второй свин­ке вводят смесь той же культуры и нормальной сыворотки. Через 10, 30 и 60 мин из брюшной полости пипеткой берут эксудат, из которого готовят мазки и их окрашивают. Кроме того, готовят препарат «висячая капля». Препараты изучают в микроскопе. В окрашенных препаратах наблюдают стадии бактериолиза. В препарате «висячая капля» вибрионы сначала подвижны, потом они начинают набухать и разрушаются. Эксудат, взятый от контрольной свинки, во всех препаратах содержит большое количество подвижных вибрионов и в дальнейшем число их увеличивается. Контрольное животное погибает.