Реакцию кольцепреципитации ставят в узких пробирках. В опытную пробирку наливают 0,1-0,5 мл диагностической преципитирующей сыворотки, в контрольную такое же количество нормальной сыворотки. Затем пастеровской пипеткой, держа пробирки наклонно, медленно по стенке в обе пробирки наслаивают преципитиноген, так чтобы слои жидкостей не перемешивались. Пробирки ставят горизонтально и через 1-2 минуты учитывают результат. Если исследуемый антиген соответствует антителам диагностической сыворотки, в опытной пробирке на границе жидкостей образуется белое кольцо преципитации. В контрольной пробирке такого кольца не будет.
В тетради записывают результат и делают вывод:
Реакция преципитации ………………………………………………………..
ЗАНЯТИЕ 25
ТЕМА: НЕПОЛНЫЕ АНТИТЕЛА. РЕАКЦИЯ КУМБСА. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕННЫХ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ
Цель занятия: Изучить сущность и методы постановки реакций на выявление неполных антител. Изучить сущность реакций с использованием меченых антигенов или антител, их достоверность и информативность.
План занятия
1. Неполные антитела
2. Методы выявления неполных антител
3. Реакция иммунофлюоресценции
4. Реакция иммуноферментного анализа
5. Реакция радиоиммунного анализа
Неполные антитела – это антитела, которые реагируют с антигеном одним активным центром, в результате видимый комплекс не образуется, реакция визуально не проявляется. Неполные антитела называют также непреципитирующими, так как они не дают реакции преципитации. Неполные антитела, в отличие от полных, более устойчивы к нагреванию, легче проникают через плаценту. Впервые они были обнаружены к резус-антигену, потом их стали находить при бактериальных и вирусных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, аллергических состояниях, гемолитической анемии.
Наибольшей интерес представляют неполные антитела к
резус-
антигену
эритроцитов. Несовместимость крови матери и плода по резус-антигену (отсутствие
у матери и наличие у плода) является
причиной гемолитической
болезни плода и новорожденных. Выявляют
неполные антитела в реакции Кумбса.
Реакция Кумбса
Для
выявления неполных антител предложена иммунологическая диагностическая проба Кумбса (реакция
Кумбса, антиглобулиновый
тест).
Она выявляет антитела к резус-антигену эритроцитов, бактериальным антигенам в
сыворотках больных. Эти антитела появляются уже в первые дни болезни. Название пробы связано с именем английского иммунолога Кумбса, предложившего эту реакцию.
Реакция Кумбса является одним из
методов ранней диагностики инфекционных заболеваний.
Различают два варианта реакции Кумбса:
1. Прямая реакция Кумбса
2. Непрямая реакция Кумбса
Прямая реакция Кумбса. В прямой реакции Кумбса выявляет антитела, связанные с эритроцитами. Для этого исследуемую кровь смешивают с антиглобулиновой сывороткой. Антитела антиглобулиновой сыворотки взаимодействуют с неполными антителами, находящимися на поверхности эритроцитов и склеивают последние.
Положительная прямая реакция Кумбса служит основным диагностическим признаком при приобретенной аутоиммунной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных.
Непрямая реакция Кумбса. В непрямой реакции Кумбса выявляют антитела, свободно циркулирующие в сыворотке крови. Реакция проводится в два этапа. Нa первом этапе неполные антитела адсорбируют из сыворотки на нормальных эритроцитах, можно на бактериальных клетках, риккетсиях. На втором этапе эти эритроциты смешивают с антиглобулиновой сывороткой, полученной путем гипериммуниэации животных антителами человека. Молекула антиглобулина соединяет две молекулы неполных антител, фиксированных на разных эритроцитах, наступит реакция агглютинации эритроцитов, которая будет наблюдаться уже через 10 минут, по ней можно судить о наличии неполных антител в исследуемой сыворотке.
Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов или антител
Серологические реакции, в которых используются меченые антигены или антитела, отличаются высокой чувствительностью и находят все более широкое применение в диагностике инфекционных заболеваний как для обнаружения и идентификации антигена в исследуемом материале, так и для обнаружения антител в сыворотке крови больных. Метят антигены или антитела флюорохромами, ферментами или радиоактивными изотопами. При этом антигены и антитела, образовывая комплексы с метками, не утрачивают способности к иммунному реагированию.
Реакция иммунофлюоресценции
Реакция иммунофлюоресценции используется для выявления микробных или вирусных антигенов, локализованных в пораженных тканях или патологическом материале. Меченые антитела получают путем обработки иммунной сыворотки флюорохромами.
Различают два варианта постановки реакции иммунофлюоресценции:
а) Прямой метод Кунса. Этот метод может быть использован для экспресс-диагностики. Он обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Метод заключается в обработке среза ткани или мазка из патологического материала сывороткой, содержащей антитела к предполагаемому антигену, меченые флюорохромом. После промывания препарата, при котором удаляются свободные антитела, его просматривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате присутствует антиген, он свяжется с мечеными антителами, образуется комплекс, который будет давать свечение в ультрафиолетовом свете.
б) Непрямой метод Веллера и Кунса. Этот метод имеет преимущество как более чувствительный и как более доступный. Он позволяет использовать одну флюоресцирующую сыворотку, содержащую антитела против глобулинов кролика и набор немаркированных иммунных кроличьих сывороток к различным антигенам.
Непрямой
метод ставится в два этапа. На первом этапе препарат
обрабатывают
диагностической иммунной сывороткой. На втором этапе -
люминесцирующей антисывороткой. При
положительном результате
образуется иммунный комплекс, состоящий
из антигена, антител к нему
имеченых антиглобулинов, этот комплекс будет
светиться в ультрафиолетовых лучах.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.