8. Методы оценки клеточного иммунитета (Т-системы)
Методы оценки иммунной системы организма
Оценка иммунного статуса является важнейшей задачей клинической иммунологии с целью установления диагноза, выяснения прогноза, выбора средств терапии и контроля за лечением иммунокоррегирующими средствами.
При оценке иммунного статуса следует учитывать общую и индивидуальную иммунологическую реактивность, проводить дифференцированную оценку неспецифических и специфических факторов, Т- и В-системы лимфоцитов и т.д.
Оценка Т- и В-системы иммунитета включает тесты для определения количественного содержания иммунокомпетентных клеток и тесты для определения функциональной активности Т- и В-лимфоцитов.
Для определения количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови используют розеткообразующий тест.
Розеткообразующий тест для определения Т-лимфоцитов крови (Е-POK)
Тест образования Е-розеток основан на способности эритроцитов
Схема 12
Оценка иммунного статуса человека
Тесты 1 уровня Число лейкоцитов и лейкоцитарная формула
(определяются
в клинических
лабораториях) Общее число лейкоцитов Нейтрофилов Лимфоцитов Моноцитов Базофилов Эозонофилов
4,5-9,5 тыс/мкл 50-77% 18-38% 2-10% 0,5-1% 1-5%
Абсолютное и относительное число Т- и В-лимфоцитов
 |
Абсолютное число лимфоцитов Т-лимфоциты В-лимфоциты
800-3600/мкл 800-2500/мкл 100-900/мкл
40-80% 10-30%
Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови
Ig М 0,5-2,0 г/л Ig G 7,0-20,0 г/л Ig А 0,5-5,0 г/л
Фагоцитарная активность лейкоцитов крови
 |
Кандида альбиканс – ФИ = 40-90% Золотистый стафилококк – ФИ = 40-80%
ФЧ = 1-2,5 ФЧ = 4-9
Тесты 2 уровня Определение субпопуляций Реакция Активность киллерных Другие
Т-лимфоцитов бласттрансформации клеток
барана адсорбироваться на соответствующих рецепторах Т-лимфоцитов. Постановка пробы состоит из двух этапов. На первом этапе из крови выделяют лимфоциты. Для этого 2 - 3 мл крови помещают в пробирке с гепарином и разводят в два раза раствором Хенкса или среды 199. Разведенную кровь наслаивают на 2,5 мл смеси фиколлуротраст, центрифугируют ее 25-35 мин, образовавшийся слой лимфоцитов забирают пипеткой.
На втором этапе смешивают 0,1 мл взвеси лимфоцитов (концентрация клеток 2:106 клеток/мл) с 0,1 мл 0,5% взвеси бараньих эритроцитов. Смесь центрифугируют 5 мин при 200 об/мин и помещают в холодильник на один час при 4°С. Из осадка делают мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе и просматривают в микроскоп. Розеткой считается, если к лимфоциту прикреплено не менее 3 эритроцитов. При учете этой реакции оценивают не только количественное (процентное) содержание Т-лимфоцитов, но и функциональное их состояние.
В норме у человека количество Т-лимфоцитов достигает 50%. В сенсибилизированном организме розеткообразование значительно усиливается.
Розеткообразующий тест для определения В-лимфоцитов крови (ЕАС-РОК)
Тест образования ЕАС-розеток основан на способности эритроцитов, соединенных с соответствующими антителами и комплементом, адсорбироваться на рецепторах к комплементу В-лимфоцитов.
Сначала готовят сенсибилизированные эритроциты. Для этого 1 мл эритроцитов барана (концентрация 1:109 клеток/мл) смешивают с 1 мл гемолитической сыворотки в концентрации, не вызывающей агглютинации и инкубируют 30 мин при 37°С. После этого эритроциты отмывают и смешивают с комплементом мыши, инкубируют 15 мин при 37°С. Из смеси готовят мазок, фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимзе и смотрят под микроскопом. В норме у человека количество В-лимфоцитов достигает 10-30%.
Для оценки функциональной активности Т-лимфоцитов применяют тесты:
1. Иммунный ответ стимулированных лимфоцитов. Антигенная стимуляция приводит к изменению синтеза белка сенсибилизированными клетками. Основным показателем этого процесса служат: а) активация синтеза ядерной ДНК и РНК; б) продукция медиаторов (лимфокинов).
2. Реакция бласттрансформации ин витро (РБТЛ). Реакция основана на способности малых лимфоцитов превращаться в большие пиронинофильные клетки, способные к дальнейшей пролиферации в присутствии неспецифических и специфических стимулов. В качестве неспецифических стимулов используют фитогемагглютинин из фасоли, зимозан из дрожжей и др. Трансформация в бластные клетки оценивается морфологически или с помощью изотопной метки. Кроме того, изучают зависимость реакция от дозы и времени воздействия антигена.
Реакцию применяют для доказательства клеточной сенсибилизации: гетерологической при бактериальных, вирусных, грибковых заболеваниях, а также на лекарственные препараты, пищевые продукты и аутосенсибилизации при ревматоидном артрите, гепатите, тиреоидите.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.