Каждый цикл синтеза специфических областей ДНК-мишени – амплификация – состоит из трех стадий:
1. Денатурация. При 94°С происходит разделение цепей ДНК.
2. Ренатурация. При 57-62°С происходит присоединение (отжиг) праймеров к гомологичным последовательностям на ДНК-мишени.
3. Синтез. При 72°С происходит синтез новых цепей ДНК путем удлинения праймера в направлении 5/-3/.
Каждый цикл, обычно, длится 3-5 минут. В каждом цикле происходит удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 35 циклов наработать фрагмент ДНК, ограниченный парой выбранных праймеров, в количестве, достаточном для его исследования с помощью электрофореза.
Схема 19
Цикл процесса амплификации фрагмента ДНК возбудителя в ПЦР
 |
1 – стадия денатурации; 2 – стадия ренатурации; 3 – стадия синтеза.
Схема 20
Второй и следующие циклы амплификации
фрагмента ДНК возбудителя в ПЦР
Преимущества ПЦР-диагностики:
· Выявление специфического участка ДНК микроорганизма дает возможность заключения о присутствии возбудителя инфекционного процесса в исследуемом материале.
· С помощью ПЦР возможно выявление даже единичных клеток возбудителя инфекционного процесса, независимо от его принадлежности к внутриклеточным, внеклеточным или другим видам инфекции. Поэтому же количество исследуемого материала, необходимого для проведения исследования, мало и может составлять несколько десятков микролитров.
· ПЦР является высокоспецифичной, так как из исследуемого материала выделяют уникальный, характерный только для данного вида возбудителя, фрагмент ДНК или РНК.
· За счет автоматизации всех этапов ПЦР, длительность метода составляет 6-8 часов.
· Для проведения ПЦР не требуется выделение и выращивание возбудителя, исследование проводится с использованием клинического материала, который может быть продезинфицирован химической или термической обработкой, в момент взятия, поэтому исключается возможность инфицирования персонала.
Библиографический список
Основной
1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология // М.:Медиц. информ. агенство, 2002, 736 с.
2. Борисов Л.В., Кузьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С., Федорова З.В. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии // М.: Медицина, 1994, 252 с.
3. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 288 с.
4. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1983, 512 с. с илл.
5. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология // Санкт-Петербург: Спец. Литература, 2000, 591 с.
6. Поздеев О.К. Медицинская микробиология // М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, 768 с.
7. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология // М.: Медицина, 1980, 512 с.
8. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 528 с.
9. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.: ил.
Дополнительный
1. Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. – Москва: ГЭОТАР-МЕД, 1998, 200 с.
2. Букринская А.Г. Вирусология // М.: Медицина, 1986, 336 с.
3. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии // Под ред. В.В.Теца.-М.: Медицина, 2002, 352 с.
4. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А.Воробьева, А.С.Быкова – М.: Медицинское информационное агентство, 2003. – 236 с.; ил.
СОДЕРЖАНИЕ
ЗАНЯТИЕ №20
Тема: Инфекция …………………….………………………………………....3
ЗАНЯТИЕ №21
Тема: Иммунитет. Формы иммунитета. Физиологические
механизмы видового иммунитета ……………………………………………8
ЗАНЯТИЕ №22
Тема: Антигены. Антитела. Классы иммуноглобулинов.
Структура. Свойства. Место образования иммуноглобулинов.
Методы выявления антител и антигенов ………………………….…………14
ЗАНЯТИЕ №23
Тема: Реакции иммунитета. Реакция агглютинации ………………………..17
ЗАНЯТИЕ №24
Тема: Реакция преципитации …………………………………………………25
ЗАНЯТИЕ №25
Тема: Неполные антитела. Реакция Кумбса.
Реакции иммунитета с использованием меченных
антигенов и антител ……………………………………………………………30
ЗАНЯТИЕ №26
Тема: Реакция иммунного лизиса: бактериолиза, гемолиза.
Реакция связывания комплемента …………………………………………….35
ЗАНЯТИЕ №27
Тема: Реакция нейтрализации токсина антитоксином.
Реакция флоккуляции ………………………………………………………….42
ЗАНЯТИЕ №28
Тема: Т- и В-системы иммунитета. Взаимодействие
клеток при реализации иммунного ответа. Характеристика
трансплантационного иммунитета.
Оценка иммунного статуса ……………………..…………….. ……………....47
ЗАНЯТИЕ №29
Тема: Особенности противовирусного иммунитета.
Реакции иммунитета при вирусных заболеваниях ..…………..……………...51
ЗАНЯТИЕ №30
Тема: Гиперчувствительность немедленного типа
(В-зависимая аллергия). Ее механизмы. Гиперчувствительность
замедленного типа (Т-зависимая аллергия). Ее механизмы.
Значение при инфекционных заболеваниях …………………..………………60
ЗАНЯТИЕ №31
Тема: Специфическая профилактика и терапия
инфекционных заболеваний …………………………………………………...63
ЗАНЯТИЕ №32
Тема: Полимеразная цепная реакция в диагностике
инфекционных заболеваний …………………………………………...……….67
Библиографический список ………………….…………………....…………....72
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.