Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям

Тема: Возбудители зоонозных заболеваний: Yersiniapestisедрой() преобритено в

ся соискателем в других организациях. всеросийских.

Морфология, биология, культурные свойства возбудителя чумы. Лабораторный диагноз, профилактика

Цепь занятия : Ознакомить студентов с особенностями работы с возбу­дителями особо опасных инфекций, характеристикой возбудите­ля чумы, эпидемиологией, методами микробиологической диаг­ностики, препаратами дня специфической профилактики

Контрольные вопросы :

1. Особо опасные инфекции, режим работы с возбудителями этих заболеваний

2.  Морфологические и биологические свойства возбудителя чумы

3.  Патогенность палочки чумы

4. Эпидемиология и патогенез чумы

5. Методы микробиологической диагностики чумы : бактериологичес­кий, биологический

6. Специфическая профилактика чумы

Методические указания к демонстрации

1. Мазок из чистой культуры  Yersinia pestis,окраска метиленовым синим

Характерной морфологической особенностью является овоидная форма микроба, биполярная окрашиваемость. Биполярная окрашиваемость обусловлена неравномерным распределением цитоплазмы, когда средняя часть клетки почти не окрашивается, а полюса окрашены ин­тенсивно

2.  Yersinia pestis в мазке-отпечатке из органов, окрашенном по Граму

В мазке на фоне ткани органа наблюдается значительное коли­чество возбудителей в виде мелких грамотрицательных овоидных пало­чек, биполярно окрашенных

3.   Колонии вакцинного штамма палочки чумы на среде Туманского

При микроскопий с малым увеличением на среде Туманского вид­ны плоские колонии с приподнятым желтоватым или коричневым центром и бесцветным полупрозрачным неровным краем. Эти колонии палочек чумы принято сравнивать по внешнему виду со "смятым кружевным платком".

4.   Чумная живая вакцина

      Живая  чумная вакцина содержит высушенную взвесь живых бактерий вакцинного штамма чумного микроба, полученного Жираром и Робиком из вирулентной культуры путем последовательных пересевов возбудителя на питательных средах в течении 5 лет.

Вакцину применяют накожно или подкожно для формирования ак­тивного иммунитета против чумы людям, которым угрожает опасность заражения. Продолжительность иммунитета около года.  5.Диагностический чумной фаг

Чумной фаг представляет собой фильтрат, содержащий корпуску­лы фага и лизат бульонной культуры чумного микроба,  обеззараженный фильтрацией через бактериальные фильтры. Препарат используется для идентификаций возбудителя чумы. Пробу ставят о цельным фагом по методу Грациа или для  ориентировочных проб методом «стерильного» пятна.

Методические указания к практической работе .

1. Знакомство со схемой лабораторного диагноза чумы по таблице

Лабораторное исследование при чуме имеет исключительное зна­чение и  очень ответственно, так как позволяет не только эффектив­но лечить больного в ранние сроки, но и быстро применить противо­эпидемические мероприятия для предупреждения вспышки.

Выделение и изучение чистой культуры возбудителя могут про­водить лишь специализированные противочумные организации с доста­точно подготовленными в этой области специалистами при строгом соблюдении особого режиме работы.

С возбудителем чумы врач может встретиться при исследовании материала от больного без установленного клинического диагноза или с подозрением на другое инфекционное заболевание, поэтому врач должен знать какие данные исследования могут служить пово­дом для подозрения на чуму и какие срочные меры нужно при этом принять.

Уже первичное микроскопическое исследование материала может явиться основанием для предварительного диагноза чумы, в этом слу­чае следует развертывать в очаге противочумные мероприятия.                     Микробиологический диагноз чумы

Основные методы исследования . 1.Микроскопический 2Бактериологический

  3.Биологический

Материал для исследования от больного забирают в зависимос­ти от формы чумы. Им может быть отделяемое язвы или пунктат карбункула при кожной форме чумы, пунктат бубона при бубонной форме, мокрота при легочной форме, кровь при всех формах заболевания. Кровь, отделяемое язвы и пунктат бубона забирают хорошо подогнанным стерильным шприцем. Мокроту собирают в широкогорлую стерильную стеклянную банку.

При эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы материалом для исследования служат блохи, у которых изучают со­держимое кишечника, и грызуны, как болеющие, так и павшие.  Бактериоскопический метод

Бактериоскопический метод основан на обнаружении возбудите­ля в исследуемом материале. Из материала готовят мазки, фиксируют в смеси Никифорова (равные объемы спирта и эфира), окрашивают по Граму и Леффлеру (метиленовым синим). Наличие в мазках значительного количества микробов в виде мелких, биполярно окрашенных пало­чек дает право поставить предварите явный диагноз. Достоверность бактериоскопического исследования повышается пря применении иммунолюминесцентного метода исследования. С этой целью мазки из патологического материала обрабатывают противочумной люминесцирующей сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе. Возбудитель чумы виден в поле зрения в виде мелкой палочки с ярко окрашенным зеленоватым ореолом.

Бактериологический метод.

Основан на выделений культуры возбудителя. Палочка чумы до-вольно хорошо растет на питательных средах. Материал , незагрязнен­ный посторонней флорой, засевают на плотные (МПА) и жидкие (МПБ) питательные среды. Использование сред с добавлением гемолизирован-ной крови позволяет выявить рост микроба при незначительном со­держаний его в исследуемом материале_. Материал, содержащий посто­роннюю флору (мокрота, содержимое открытых язв) высевают на среду Туманского (содержит генцианвиолет 1:50000, подавляющий рост посторонней флоры). Посевы инкубируют при 28°С. Через 15-18 часов изучают рост колоний на плотных средах при малом увеличении мик­роскопа о опущенным конденсором. Вначале появляются маленькие по­лупрозрачные глыбки, разрастающие в плоские с ажурным краем колонии. Через 2 суток колонии утрачивают типичную форму, но сохраня­ют пигментацию и шероховатую поверхность. На 2-3 подозрительные колонии наносят диагностический чумной фаг. Лизис колоний под действием фага имеет диагностическое   значение. На МПБ рост чумного микроба заметен через сутки. Возбудитель растет в виде хлопь­ев, взвешенных в прозрачной среде, такой же хлопьевидный осадок  образуется на дне пробирки.

Из бульона и колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму.

При наличии в мазке полиморфных грамотрицательных палочек из колоний отсевают культуру для идентификаций и дифференциации с псевдотуберкулезными бактериями. Для этого чистую культуру высе­вают на среды с глюкозой, мальтозой, сахарозой, рамнозой, манитом, ставят пробу с бактериофагом. На четвертый день исследова­ния учитывают результаты: