Сбор испражнений можно производить не дожидаясь акта дефекаций, а вводить в прямую кишку ватные тампоны, ректальные петли (двойные алюминиевые петли, вмонтированные в ручку) или ректальные трубки (трубки Цимана). Ректальные трубки представляют собой стеклянные трубки диаметром от 5 мм. (для детей) до 15 мм (для взрослых), длинной около 150 мм, нижний конец запаян и оплавлен, на расстоянии 15-20 см. от запаянного конца имеется два оплавленных отверстия, расположенных на противоположных стенках, одно ниже другого. Открытый конец закрыт ваткой, трубки опускают через ватную пробку в пробирку и в таком виде стерилизуют. Трубку вводят в прямую кишку, она прилегает к стенкам слизистой и при вытягиваний матерная через отверстия скапливается внутри трубки.
Исследование секционного материала нужно проводить как можно быстрее после смерти. Исследуют кишечник, мезентериалъные железы, кусочки печени, селезенки. Материал доставляют в стерильной посуде - баночках, широких пробирках.
Основным методом исследования при дизентерии является бактериологический.
Бактериологический метод применяют для выделения возбудителя и его идентификации. Наибольшее количество положительных результатов получают при посеве материала у постели больного, но такой посев не всегда можно сделать, поэтому для предупреждения гибели возбудителей материал помещают в консервант - глицериновую смесь или фосфатный буфер.
I этап
В первый день исследования производят посев материала на cpeдy Плоскирева, эозинметиленовую среду (среда Левина) и другие. Так как каждая среда обладает каким-нибудь недостатком, рекомендуется использование двух сред. Особое место занимают среды с добавлением желчных солей, они высокоэффективны и создают тем самым весьма благоприятные условия для выявления дизентерийных бактерий.
Для посева выбирают слизисто-гнойные комочки большой стерильной петлей, промывают их дважды в стерильном изотоническом растворе и переносят на поверхность среды в чашки Петри. Затем берут стерильный шпатель и досуха растирают материал в этой чашке, потом, не прожигая шпателя, производят посев во второй и третьей чашке. Можно делать высев и на 1 чашке по секторам. Засеянные чашки помещают в термостат на 18-20 часа при 37°С.
П этап
На второй день чашки просматривают невооруженным глазом и при помощи лупы. На дифференциально-диагностических средах шигеллобразуют бесцветные прозрачные круглые, слегка выпуклые блестящие колонии. Палочки Зонне могут давать плоские распластанные с неровным краем колонии, мутные, но сохраняющие прозрачность.
Подозрительные колонии отсевают на комбинированную среду Олькеницкого и помещает в термостат на сутки. Эта среда позволяет определить у наследуемых культур ферментацию углеводов, мочевины, образование сероводорода. Среду готовят таким образом, чтобы была и скошенная поверхность и столбик высотой 3-4 см. Исследуемую культуру засевают штрихом по скошенной поверхности, а также уколом в глубину столбика. Так как в среде содержится небольшое количестве глюкозы, ферментация её идет в анаэробных условиях, среда Олькеницкого изменит цвет в столбике сбраживание лактозы и сахарозы идет в аэробных условиях, среда изменит цвет и в скошенной поверхности и в столбике. При разложении мочевины рН среды становится резко щелочной - вся среда станет оранжевой. При образовании сероводорода наблюдается почернение среды.
Ш этап
После суточного инкубирования для дальнейшего исследования отбирают культуры, ферментирующие глюкозу, т.е. те пробирки с культурой в которых среда Олькеницкого изменила цвет в столбике. У культур, подозрительных по своим ферментативным и культуральным свойствам на Шигеллы, изучают антигенную структуру для определения вида. Если таких культур нет, выдают отрицательный ответ.
Вид, серовар, подсеровар выделенной культуры устанавливают при помощи адсорбированных шигеллезных сывороток. Анализ антигенной структуры начинают с реакций агглютинации на стекле со смесью №1. В эту смесь входят сыворотки с антителами кшигеллам Зонне, Ньюкасл и поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера. При положительной реакции со смесью выделенную культуру агглютинируют с каждой сывороткой, входящей в смесь. Если реакция положительна с сывороткой к шигеллам Зонне и Ньюкасл, выдают ответ. Если культура агглютинируется поливалентной сывороткой к шигеллам Флекснера, изучение антигенной структуры выделенной культуры продолжают с типовыми групповыми сыворотками к шигеллам Флекснера, и при положительной реакции с одной из групповых и типовых сывороток определяют по таблице серовар и подсеровар шигеллы.
При отсутствии агглютинации со смесью №1 ставят реакцию агглютинации с другими поливалентными сыворотками.
Идентификация выделенных культур не представляет затруднений, если их биологические и серологические свойства совпадают с характеристикой одного из видев шигелл. Если же есть отклонения от типичной характеристики, то проводят дополнительные исследования, позволяющие с уверенностью подтвердить или исключить принадлежность выделенной культуры к шигеллам. В первую очередь изучают ферментативную активность на "пестром ряду", способность расщеплять аминокислоты, С целью подтверждения принадлежности культуры к шигеллам, определяют способность культуры лизироваться поливалентным дизентерийным фагом. Одним из надежных тестов, позволяющим установить принадлежность выделенной культуры к шигеллам, является керато-конъюнктивальная проба, которую ставят на морских свинках, вводя им в конъюнктивальный мешок петлю суточной культуры. Свежевыделенные шигеллы вызывают, как правило, выраженный кератит на 2-5 день после введения культуры в глаз. Следует помнить, что кератоконъюнктивит способны вызывать и некоторые серовары энтеропатогенной кишечной палочки.
По проведенному исследованию выдают ответ.
В качестве ускоренного катода диагностики дизентерии применяют люминесцентную микроскопию исследуемого материала.
Серологический метод лабораторной диагностики дизентерии основан на обнаружение антител к шигеллам в сыворотке крови больных дизентерией. Антитела появляются на 5-8 день болезни. Максимальное накопление их происходит на 2-3 недели.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.