Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям, страница 10

            Изучить этапы лабораторного исследования

            Изучить препараты для специфической профилактики

             холеры.

Контрольные вопросы:

1. Особенности работы с возбудителями особо опасных инфекций

2. Характеристика холерных вибрионов, их биологические особенности.

3. Культуральные и ферментативные свойства холерных вибрионов

4. Классификация вибрионов по антигенной структуре

5.  Патогенность для человека и факторы ее обеспечивающие

6. Особенности забора и доставки исследуемого материала в лабораторию

7. Особенности бактериологического исследования при подозрении на холеру

8. Этапы лабораторного диагноза

9. Дифференциация холерных вибрионов Эль-Тор

10. Эпидемиология холеры

11. Специфическая профилактика холеры

Методы указания к демонстрации

1. Чистой культуры холерного вибриона в мазках, окрашенных по Граму

Холерные вибрионы вмазке, окрашенном по Граму, имеют форму изогнутой палочки длиной 1,5-3 мкм, шириной 0,5 мкм, грамотрицательные.

2.Вибрион Эль-Тор в мазке-отпечатке со слизистой кишечника погибшего от холеры

Вибрион Эль-Тор в мазке-отпечатке со слизистой тонкого кишечника, окрашенном по Граму, хорошо виден на фоне грамотрицательно окрашенных клеточных элементов слизистой и кишечного содержимого в виде скоплений или одиночно расположенных вибрионов(слегка изогнутые палочки с закругленными концами), окрашенных в розовый цвет.

3.Инструменты для забора материала

Флаконы (пробирки) с завинчивающимися или другими пробками, удобные для транспортировки по 10-15 мл; металлические (картонные,

деревянные) ложки для забора материала; металлические сосуды (биксы, вёдра); ящики для транспортировки исследуемого материала.

4. Элективные питательные среды

1%щелочная пептонная вода (рН 8,9-9,0)

Холерные вибрионы к средам неприхотливы, щелочелюбивы. Электив­ной для них средой является 1% щелочная пептонная вода , на ко­торой уже через 3-6 часов наблюдается рост культуры на поверхнос­ти среды в виде нежной голубоватой пленки, бульон остается прозрач­ным, в более поздние сроки появляется диффузное помутнение.

Щелочной агар (рН 7,8-8,0)

Холерные вибрионы быстро и обильно размножаются, поэтому уже через 10-12 часов на агаре вырастают круглые гладкие плоские голубо­ватые в проходящем свете гомогенные с ровным краем колонии  до 2мм в диаметре,

5.Пестрый ряд с посевом холерных вибрионов

Биовары	Манноза	Сахароза	Арабиноза
Классический холерный вибрион Вибрион Эль-Тор	К К	К К	- -

Сделан посев на жидкие среды Гисса, содержащие углеводы и индикатор Андреде. При разложении углеводов до кислоты среда краснеет, если углеводы не ферментированы, то среда цвет не изменит. Основным признаком для холерного вибриона считается расщепление сахарозы и маннозы  и отсутствие расщепления арабинозы (группа I Гейберга).

6.  Посев на лактозосахарозной среде

Лактозосахарозная среда содержит питательную основу, 1% лакто­зы, 0,1% сахарозы и индикатор Андреде. Среду готовят так, чтобы был столбик и скошенная поверхность. Посев культуры делают штри­хом по скошенной поверхности и уколом в глубину столбика.

Посев на лактозосахарозную  среду делают для дифференциации холерных вибрионов и кишечной палочки. Вибрионы ферментируют сахарозу до кислоты и не сбраживают лактозу, поэтому на лактозосахарозной среде наблюдают покраснение столбика, скошенная поверх­ность не изменена. Кишечная палочка ферментирует лактозу до кисло­ты и газа, поэтому среда покраснеет и в столбике и на скошенной поверхности, видны также пузыри газа.

7. Развернутая реакция агглютинации с холерными О- и   Н-сыворотками

Развернутая реакция агглютинации поставлена с диагностичес­кими холерными сыворотками для изучения антигенных свойств выде­ленных вибрионов и дифференциации холерных и нехолерных.

Наблюдают положительную реакцию агглютинации до 1/2 титра с холерными О- и Н-сыворотками. Основным является агглютинация куль­туры холерной 0-сывороткой, так как только по О-антигену холерные вибрионы отличаются от нехолерных. Н-антиген является общим у хо­лерных и нехолерных вибрионов, культуры нехолерных вибрионов будут агглютинироваться только холерной Н-сывороткой, но не О-сывороткой

8. Холерная вакцина

Холерная вакцина представляет собой взвесь выращенных на ага­ре холерных вибрионов, убитых нагреванием или формалином.

Холерная вакцина Эль-Тор

Холерная вакцина Эль-Тор представляет собой взвесь выращен­ных на агаре холерных вибрионов Эль-Тор, убитых нагреванием или формалином. Эффективность вакцины обусловлена содержанием в ней специфических антигенов вибрионов (корпускулярного и растворимо­го) серологических типов Инаба и Огава.

Вакцину вводят строго подкожно взрослым и детям (стар­ше 2 лет) для профилактики холеры двукратно с интервалом 7-10 дней. При проведении плановой массовой вакцинации прививку прово­дят в первую очередь лицам, вероятность заражения которых очень высокая: медицинские работники, участвующие в проведении работ по борьбе с холерой, работники очистных и канализационных соору­жений; лица, занятые сбором мусора, работники новостроек, пересе­ленцы и сезонные рабочие, проживающие в неудовлетворительных бы­товых условиях.

Иммунитет на вакцину развивается в течение 30 дней после второго введения препарата, сохраняется до 6 месяцев, постепенно угасая. Это должно учитываться при определении сроков плановой вакцинации с учетом предполагаемого подъема заболеваемости.

Холероген-анатоксин

Холероген-анатоксин представляет собой препарат, полученный из холерного экзотоксина, обезвреженного формалином. Использует­ся в профилактике холеры для создания антитоксического иммунитета. Вводят вакцину подкожно по эпидемическим показаниям.

Методические указания к практической работе

I. Изучение этапов лабораторного исследования на холеру по схеме

Для своевременного проведения правильных противохолерных мероприятий, в распознавании холеры, особенно первых её случаев, важную роль играет лабораторная диагностика.