Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям, страница 5

Бруцеллин представляет собой фильтрат З-недельной убитой

нагреванием бульонной культуры бруцелл овечьего, коровьего и свиного видов. Это прозрачная жидкость светло-желтого цвета. Исполь­зуется для постановки внутрикожной пробы Бюрне.

Методические указания к практической работе

 1. Знакомство со схемой лабораторного диагноза бруцеллеза по таблице

               Под названием бруцелл объединены виды микробов, вызывающих бруцеллез- зоонозную инфекцию, встречающуюся у человека при заражении от больных животных. Для человека патогенны три вида:

                    B. melitensis – возбудитель бруцеллеза мелкого рогатого скота,

                    B. abortus – возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота

                     B. suis – возбудитель бруцеллеза свиней.

               Наиболее вирулентным является первый вид; второй и третий виды вызывают спорадические случаи заболевания.

               В диагностике бруцеллеза важную роль играет микробиологический диагноз, так как клинические проявления заболевания у людей характеризуются разнообразной пестрой симптоматикой.

                Для постановки микробиологического диагноза бруцеллеза применяют:

1.  Бактериологический метод

2.  Серологический метод

3.  Кожно-аллергическую пробу

4.  Биологическую пробу

            Микроскопическое исследование материала от больного не дает положительных результатов и практически не применяется.

Бактериологическое исследование

             Бактериологическое исследование основано на выделении чистой культуры бруцелл из исследуемого материала, взятого от больного, и является бесспорным методом диагностики.

              Материалом для исследования чаще всего служит кровь больного, реже исследуют мочу, желчь, костный мозг. Кровь для посева берут асептично стерильным шприцом, костный мозг забирают также как кровь; мочу берут стерильным катетером в стерильную посуду.

               Выделение гемокультуры проводят в начале острого заболевания или у хронических больных в периоде обострения, до назначения   антибактериальной терапии, так как во время лечения антибиотиками культуру выделить не удается. Взятую на исследование кровь или костный мозг засевают в 2 флакона с печеночным бульоном или двойной средой

 Так как возбудитель бруцеллеза бычьего вида при первичном выделении требует повышенного содержания углекислоты (5-10%), то один флакон помещают в закрытые сосуды о соответст­вующей концентрацией углекислого газа.

Особенностью возбудителей является их медленный рост в пер­вых генерациях, поэтому посевы выдерживают в термостате до 30 дней и, начиная с 4 дня среды просматривают, при отсутствии роста на двойной среде, агар вновь орошают бульоном, а из печеночного бульона ежедневно производят высев на агаровую среду. При положи­тельном результата на агаре   вырастают нежные бесцветные колонии с перламутровый блеском. Колонии целесообразно изучать в стерео­скопическом микроскопе, так как они мелкие.

Дня ускорения роста бруцелл применяет посев исследуемой крови в желток свежих куриных яиц, из которых через 5 дней инку­бации при 37°С достают высев на плотные и жидкие питательные сре­ды.

Для выделения культуры из мочи и желчи исследуемый материал центрифугируют 1-2 часа при З000 об/мин и осадок высевают.

Выделенные культуры бруцелл идентифицируют на основании морфологических и культуральных признаков, агглютинации специфи­ческой сывороткой и фаголизобельность. Описанные тесты позволяют поставить диагноз бруцеллеза у обследуемого, но не определяют ви­да возбудителя. Для дифференциации бруцелл изучают потребность свежевыделенной культуры в повышенной концентрации углекислоты; образование сероводорода; бактериостатическое действие на культу­ру анилиновых красителей - основного фуксинаи тионина; агглюти­нацию моноспецифическими сыворотками и чувствительность к бруцеллезному фагу «Тб» в его рабочем разведении.

Дифференциация видов бруцелл по указанным тестам представлена в таблице.

Вид бруцелл	Бактериологическое действие красок(1:25000)		Потребность в углекислоте	Выделение сероводорода	Агглютинация моносыворотками		Чувствительность к фагу «Тб»
	Основной фуксин	тионин
					А	М
Бруцеллы  козьего вида Бруцеллы бычьего вида Бруцеллы свиного вида	+ + -	+   -   +	-   +   -	- + +	- + +	+ + -	-    +    -

Серологическая диагностика

                 Серологическая диагностика бруцеллеза основана на выявлении антител к бруцеллам. Используемые методы высоко специфичны, технически проще, чем бактериологическое исследование. Однако интерпретация полученных результатов должна проводиться с осторожностью потому, что среди населения  широко проводится вакцинация против бруцеллеза и у ранее вакцинированных лиц эти реакции могут быть положительными и свидетельствуют о поствакцинальном иммунитете.

                   Для постановки серологического диагноза применяют реакцию Райта и Хеддльсона, РПГА  и опсонофагоцитарную  реакцию. Они обладают высокой специфичностью, появляются с первых дней болезни и остаются положительными долгое время после перенесенного заболевания.

                        Реакцию Райта ставят в пробирках в начале 2-недели, т.е. в период достаточного накопления антител. В качестве антигена используют бруцеллезный единый диагностикум, представляющий, представляющий собой взвесь убитых бруцелл в 12 % растворе хлорида натрия, окрашенную в синий цвет и содержащую 1 млрд. м.к/мл. Реакцию Райта  ставят с разведениями сыворотки больного от 1:50 до 1:800 по схеме.               

                                    Схема постановки реакции Райта