Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций, энтеробактерий. Часть IV: Методические указания к практическим занятиям, страница 23

На третий день вынимают пробирки  с посевами и изучают характер их роста. В состав среды Олькеницкого входят лактоза, глюкоза, сахароза, мочевина и индикатор. Глюкозы содержится в 10 раз меньше, чем других веществ, поэтому расщепление ее идет в анаэробных условиях, среда изменит цвет в столбике. Если выделенные культуры ферментируют лактозу и мочевину (среда изменяет цвет в столбике и скошенной поверхности), то это не сальмонеллы, выдается отрицательный ответ.

Для дальнейшего изучения отбирают культуры, ферментирующие только глюкозу. У выделенных культур изучают подвижность висячей капле или в раздавленной капле, выявляют ферментативную активность на средах Гисса, пептонной воде, изучают морфологию в мазках, окрашенных по Граму и проводят анализ антигенной структуры в реакции агглютинации на стекле с поливалентной О- и монорецепторными сальмонеллезными О- и Н- сыворотками. Начинают идентификацию с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой основных серологических групп В,С,Д,Е. При положительном результате культуру изучают с монорецепторными сыворотками, входящими в смесь, с каждой в отдельности, для установления серогруппы. Если результат с поливалентной сывороткой отрицательный, культуру испытывают с сывороткой к редким группам сальмонелл.

После установления серогрупп определяют вид культуры, сначала по Н-антигену первой фазы, а потом второй фазы, ставя реакцию агглютинации с монорецепторными Н-сыворотками.

Для реакций агглютинации используют культуры, выращенные на среде Олькеницкого, при этом для реакции агглютинации с О-сывороткой культуру берут из верхней части скошенного агара, a          для агглютинации о Н-сыворотками из самой нижней части (конден­сационной воду)_, где возбудители наиболее подвижны. Установив антигенную структуру, по таблице определяют вид выделенной саль­монеллы.

Для уточнения вида выделенных атипичных сальмонелл изу­чают дополнительные дифференциальные признаки - способность к валообразованию и биологическую пробу на белых мышах.

Если культура по морфологическим, культуральным и фермен­тативным свойствам, а также антигенной структуре типична, то дают заключение об обнаружении сальмонелл с указанием серологического типа.

Серологический диагноз

Серологический диагноз сальмонеллеза основан на выявлении специфических антител. Серологический диагноз может быть, приме­нён для подтверждения клинического диагноза при отрицательном результате бактериологического исследования, а также ретроспективной диагностики сальмонеллеза. Титр антител определяют в реак­ция агглютинации (по типу реакции Видаля),готовя разведения сыворотка больного oт 1:50 до 1:800. В качестве антигена используют или живые суточные культуры сальмонелл, включая аутоштаммы, илистандартныесальмонеллезные диагностикумы. Через 7-8 дней реакцию ставят повторно. Реакция считается положительной при разведениине менее 1:100 при условии нарастания титра антител при повторной постановке реакции.

Кроме реакции агглютинации , для серологической диагностики применяют реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), которая явля­ется более чувствительной, позволяет выявить антитела в более   ранние сроки (на 3-5 день болезни).

В последние годы разрабатываются методы ускоренной диагнос­тики сальмонеллезов и, в частности  метод иммунофлюоресценции. Он основан на способности флюоресцирующих антител вступать во взаимодействиес соответствующими  антигенами возбудителей и легко обнаруживаться при люминесцентной микроскопии благодаря флюоресценции комплекса "антиген +флюоресцирующее антитело". Этот ме­тод предложен для обнаружения сальмонелл в исследуемом  материале.

2_.  Изучение препаратов для специфической терапии сальмонеллезов  (записать в тетрадь)

Тема: Шигеллы. Морфология, биология, культуральные, ферментатив­ные и антигенные свойства шигелл. Бактериологический диаг­ноз дизентерии.

Цель занятия : Изучить морфологические, культуральные и фермен­тативные свойства шигелл, ознакомиться с принципами совре­менной классификации шигелл, эпидемиологией и патогенезом дизентерии, изучить бактериологический диагноз дизентерий, препараты для специфической терапии и профилактики

 Контрольные вопросы :

1. Морфологическая и культуральная характеристика шигелл

2.Антигенная структур шигелл.

3. Классификация шигелл

4.Эпидемиология дизентерии

5. Патогенез дизентерии

6. Микробиологический диагноз дизентерии

7. Специфическая профилактика и терапия

Методические указания к демонстраций

1.Мазок из чистой культуры шигелл, окрашенный по Грану

В мазке, окрашенном но Граму , видны небольшие с закругленнымиконцами грамотрицательные палочки,  расположенные беспоря­дочно.

 2. Рост дизентерийных и кишечных палочек на среде Плоскирева

Среда Плоскирева - дифференциально-диагностическая среда_, используемая для первичного посева материала от больных дизентерией. В состав среды входят : питательная основа, лактоза, различные соли, соли желчных кислот, бриллиантовая зелень и индика­тор нейтральный красный.  Присутствие    бриллиантового зеленого ингибирует рост кишечных палочек, поэтому колоний их на среде  вырастает немного, а если они вырастут, то на среде образуются колонии красного цвета (кишечные  папочки ферментируют лактозу).  Шигеллы образуют прозрачные бесцветные колонии, т.к. не разлага­ют лактозу. Рост посторонней микрофлоры подавляется присутствую­щими в среде солями желчных кислот и бриллиантовым зеленым.

3. Пестрые ряды с посевом шигелл

 

Пестрый ряд Вид микроба	Ферментация				Образование
	Лактоза	Глюкоза	Маннит	Сахароза	Сероводорода	Индола
Шигелла дизентерии	-	к	-	-	-	-
Шигелла Флекснера	-	к	к	-	-	+
Шигелла Зонне	+ к через 7-10 дней	к	к	+ к через 7-10 дней	-	-

Примечание : К - ферментация углевода до кислоты

-    отсутствие ферментации или признака