б) капсулообразование. Изучают на
сывороточных средах или в организме
животного. Капсулообразование характерно для возбудителей
сибирской язвы и отсутствует у
сапрофитных бацилл;
в) способность гемолизировать эритроциты кролика. Она
характерна
для сапрофитных бацилл, а
сибиреязвенные гемолиза не вызывают.
г) способность дозироваться специфическим
сибиреязвенным фагом
наблюдается у сибиреязвенных бацилл,
сходные непатогенные бациллы к фагу
нечувствительны;
д) тест «жемчужного ожерелья». При воздействии
пенициллина у
бацилл возникают характерные
изменения, клетки приобретают шаровидную
ферму, а восковидная палочка и другие сапрофитные бациллы на среде с пенициллином растут как обычно.
Тест "жемчужное ожерелье" ставят следующим образом : в чашки с МПА, содержащим 0,5 и 0,05 ЕД/мл пенициллина, сеют 3-х часовую бульонную культуру выделенного микроба. Через 3 часа пребывания в термостате рост рассматривают в фазово-контрастном микроскопе при сильном увеличении. Агар покрывают стеклом. Наблюдают появление «жемчужного ожерелья» - цепочки шарообразных клеток, напоминающих ожерелье из жемчуга илибусы. Из выросшей культуры можно также приготовить мазки, окрасить и микроскопировать ,наблюдается такая же картина.
в) проверка вирулентности выделенной культуры. Её проводят на кроликах, так как слабовирулентные штаммы сибиреязвенных палочек и даже некоторые варианты сапрофитных бацилл могут вызывать гибель мышей и морских свинок. Зараженные сибиреязвенными палочками подкожно кролики погибают на 2-3 сутки с явлениями септицемии.
Биологический метод
Этот метод применяют одновременно с посевом материала на питательные среды. Исследуемый материал, вводят подкожно белым мышам, кроликам и морским свинкам. Зараженные мыши погибают через 24-36 часов, реже через 48, морские свинки и кролики через 2-4 суток. Павших животных вскрывают, делают мазки-отпечатки, которые фиксирует, окрашивают, микроскопируют. При наличии в мазках подозрительных палочек производят посевы на МПА и МПБ для выделения и идентификации культуры.
Окончательное заключение о виде культуры, выделенной от больного, дают по совокупности 2-3 главных тестов, среди них обязателен тест на патогенность. Отрицательные результаты бактериологического исследования не могут служить поводом для отклонения диагноза сибирской язвы, так как при кожной ферме болезни, или на фоке антибактериальной терапии возбудители в организме быстро отмирают и выделить культуру удается значительно реже. В этих случаях используют другие методы диагностики.
Кожно-аллергическая проба
Кожная аллергическая проба основана на способности организма формировать гиперчувствительность замедленного типа на антигены сибиреязвенных бацилл и отвечать местной аллергической реакцией на внутрикожное введение аллергена. Состояние гиперчувствительности формируется и проявляется уже в первые дни заболевания и сохраняется несколько лет. Аллерген - антраксин вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл на внутреннюю поверхность предплечья. Результат учитывают через 24-48 часов. Наличие гиперемии диаметром не менее 16 мм или гиперемии и инфильтрата свидетельствует о положительной реакции.
При сценке реакции следует учитывать, что она может наблюдаться не только у больных сибирской язвой, но и у людей вакцинированных или когда-то переболевших сибирской язвой. Кроме того, положительная реакция не антраксин может быть и у здоровых людей. Поэтому при постановке диагноза по результатам пробы нужно исходить из совокупности эпидемиологических, клинических и бактериологических показателей.
При некоторых формах сибирской язвы (легочная, кишечная), которые часто остаются не распознанными при жизни больного и устанавливаются лишь при патологоанатомическом вскрытии, выделение чистой культуры возбудителя очень затруднено. Безуспешны попытки выделения культуры из разложившихся трупов, животного сырья (шерсть, мех, кожа) объектов внешней среды. В этих случаях производят исследования, направленные на обнаружение сибиреязвенного антигена. Сибиреязвенный антиген можно обнаружить с помощью серологических методов. К этим методам относят реакцию иммунофлюоресценции и реакцию термопреципитации Асколи.
Реакция Асколи основана на термоустойчивости преципитиногена, который извлекают при кипячении или автоклавировании материала. Для этого измельченный материал кипятят в физрастворе в течение 10-15 минут, фильтруют через бумажный фильтр. Затем полученную вытяжку наслаивают на преципитирующую сыворотку. Если на границе двух жидкостей через 10 минут появляется матовое кольцо, то реакция оценивается как положительная, что говорит о присутствии сибиреязвенного антигена в исследуемом материале. Эта реакция характеризуется высокой чувствительностью.
Методы ускоренной лабораторной диагностики.
В экстремальных ситуациях сроки лабораторного исследования можно сократить, используя методы ускоренной диагностики. К ним относятся : иммунофлюоресцентный метод, реакция термопреципитации Асколи, ускоренная биологическая проба.
Ускоренная биологическая проба основана на высокой чувствительности белых мышей к сибиреязвенным бациллам. Для постановки пробы исследуемый .материал вводят 2-3 мышам внутрибрюшно. Через несколько часов из перитонеального содержимого делают мазки, в которых после специального окрашивания при положительном результате обнаруживают типичные бациллы с капсулой.
Тема: Возбудители особо опасных конвенционных заболеваний.
Возбудитель холеры- Vibrio cholerae, Vibrio cholerae El- Tor
Цель занятия: Ознакомить студентов с правилами забора и доставки
материала от больных при подозрении на холеру,
биологическими особенностями возбудителей холеры.
Отметить важность бактериологического исследования
в диагностике холеры как особо опасной инфекции.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.