Основы диагностики и терапии антифосфолипидного синдрома, страница 7

Нами проведено сопоставление результатов определения АФА,

¹                                  При определении антител к кардиолипину субстратом служит пара-нитрофенилфосфат.

²                          В соответствии с инструкцией к тест-системе на актикардиолипин измерение проводят при 405 нм.

обладающих свойствами ВА, с результатами иммунологических определений антител к кардиолипину и фосфатидилсерину (табл. 6).

Таблица 6 Содержание АФА в сыворотке крови у больных с выявленным ВА

Как видно из табл. 6, у больных с достоверно диагностированным АФС, антитела к кардиолипину выявлялись в 34%, а антитела к фосфатидилсерину - в 49% случаев, что соответствует большинству исследований, проведенных другими авторами.

Следовательно, чрезвычайно важным является определение АФА как обладающих свойствами ВА, так и лишенных этих свойств, памятуя, что именно ВА предопределяют тромбогенную опасность при АФС [12-14].

2. ОСНОВЫ МЕТОДОЛОГИИ И РАСПОЗНАВАНИЯ АНТИФОСФОЛИПИДНОГО СИНДРОМА

Все исследования должны выполнятся на БТП, полученной из правильно стабилизированной крови. Поскольку именно на этом этапе часто допускаются ошибки, влекущие за собой ошибочную диагностику, ниже рассматриваются наиболее важные моменты подготовительного этапа исследований.

Материал для исследования. Во всех тестах используется стабилизированная цитратом натрия БТП. Не рекомендуется исследование ранее замороженной плазмы.

Получение крови и ее стабилизация. Кровь берут утром натощак из локтевой вены иглой без шприца (самотеком) и смешивают с 3,8% раствором цитрата натрия.

На этом этапе нередко допускаются следующие ошибки: 1) неточность приготовления раствора стабилизатора. Важно учитывать, что трехзамещенный 5,5-водный цитрат натрия готовится в концентрации 3,8% (0,11 М), а 2-водный - в концентрации 3,2%; 2) принятое соотношение крови с раствором стабилизатора (9:1) верно лишь при нормальном гематокритном показателе (Ht). Поэтому при высоком Ht (свыше 60%) в плазме крови создается избыточная концентрация цитрата, приводящая к "ложной" гипокоагуляции, которая может быть принята за эффекты ВА, а при пониженном Ht, наоборот, возникает гиперкоагуляция и возможно частичное свертывание крови в пробирке. В табл. 7 приведены правильные соотношения объемов цитрата и крови при разных Ht; 3) одной из наиболее частых погрешностей при заборе крови является недостаточное ее перемешивание со стабилизатором. Для предотвращения этого необходимо немедленно после заполнения пробирки кровью до требуемого объема закрыть ее крышкой (не резиновой) или фрагментом полиэтиленовой пленки и 2-3 раза медленно перевернуть пробирку, не встряхивая.

Таблица 7

Соотношение объемов 3,8% раствора цитрата натрия и крови в зависимости от величины гематокрита

Стабилизированную кровь до центрифугирования (в том числе и в процессе транспортировки) хранят при комнатной температуре не более 1 ч. Перевозка крови на большие расстояния и ее встряхивание искажают результаты исследования. Кровь со сгустками и гемолизом не должна исследоваться.