- свойства органического растворителя;
- величина рН среды;
- соотношение обьемов несмешивающихся
фаз;
- число повторных экстракций.
Физико-химические методы:
-
ионнообменная хроматография;
- гель-хроматография;
- адсорбционная хроматография;
- тонкослойная хроматография;
- электрофорез;
- другие.
Сочетание
вышеперечисленных методов
Методы концентрирования вытяжек
Экстракционный
Адсобции-десорбции
Упаривание
при нониженном давлении
Экстракция лекарственных ядов из вытяжек
из биоматериала
в органический растворитель
При
использовании общих методов изолирования все лекарственные вещества
делятся на две подгруппы. Вещества, экстрагируемые органическими растворителями
из кислых водных вытяжек - «кислое» извлечение; из щелочных –
«щелочное» извлечение.
«Кислое»
извлечение - это вещества с кислотными, нейтральными, слабо- и
среднеосновными свойствами: барбитураты (барбамид, барбитал, фенобарбитал,
бутобарбитал, этаминал-натрий, бензонал, гексенал), производные ксантина
(кофеин, теобромин, теофиллин), наркотин - алкалоид опиума; меконовая кислота,
меконин – входят в состав опиума, ноксирон, салициловая кислота, антипирин,
амидопирин, фенацетин. «Щелочное» извлечение – это вещества –
с основными свойствами: хинин, опиум и омнопон, морфин, кодеин, папаверин,
галантамин, анабазин, никотин, ареколин, кониин, атропин, скополамин, кокаин,
стрихнин, бруцин, резерпин, пахикарпин, секуринин, эфедрин, аконитин, новокаин,
дикаин, аминазин, дипразин, тизерцин, хлордиазепоксид, диазепам, нитразепам, оксазепам,
апоморфин, дионин, героин, промедол, гашиш.
Однако,
такое разделение достаточно условно, т.к. большинство ядов экстрагируется
органическими растворителями, не смешивающимися с водой, как из кислых, так и
из щелочных вытяжек. Тем не менее, для каждого органического основания
существует диапазон значений рН, в котором оно экстрагируется в максимальном
количестве (область максимума экстракции).
Токсикологическая
химия - лекция №8
ОБЩАЯ СХЕМА И МЕТОДЫ АНАЛИЗА
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ЯДОВ
Различают следующие дозы
лекарственных средств (г вещества в пробе):
- терапевтические
(от минимальных, в которых лекарственные средства оказывают лечебное
действие, до высших (наибольших допустимых) ок. 10-12;
- токсические (от
минимальных, в которых лекарственные средства оказывают токсическое
действие, до средних) – ок. 10-6;
- летальные –
ок. 10-4.
В случаях летальных и токсических
доз лекарственных средств проводят судебно-химическое исследование
биоматериала из трупов. В случаях терапевтических и токсических
доз лекарственных средств проводят химико-токсикологическое
исследование биологических жидкостей живых людей.
На разных этапах этих исследований
используют разные методы. Основными критериями выбора метода анализа являются
его чувствительность и функциональность.
Таблица
Оценка чувствительности разных
методов анализа
М ЕТОД АНАЛИЗА
|
ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ* , г в пробе
|
1.Химический
- титриметрический:
- -
нейтрализация
- -
перманганатометрия
-
- йодометрия
- реакции
осаждения
-
микрокристаллоскопические реакции
|
10 -4 - 10 –3 и
выше
10 –3 и
выше
10 –3 и
выше
10 –4 и
выше
10 –6 и
выше
10 -9 - 10 –7
|
2.Гравиметрия
|
10 –4 и
выше
|
3.Полярография
|
10 –5 и
выше
|
4.ТСХ
|
10 -7
- 10 –6
|
5.Фотометрия
|
10 -8 - 10 –6
|
6.ГЖХ
|
10 -9 - 10 –7
|
7.ВЭЖХ
|
10 -10 - 10 –8
|
8.Иммунохимический
|
10 –12 - 10 –10
|
*Количество вещества в пробе в г,
обеспечивающее сигнал, вдвое превышающий уровень шума.
Параметр, используемый для
теоретической и экспериментальной оценок чувствительности методов
анализа.
Схема
ненаправленного
судебно-химического исследования биоматериала
Стадия
|
Метод и процедура
|
1.Изолирование лекарственных
ядов
|
1.Используют один из общих
методов изолирования* из биоматериала (органы, ткани, биологические
жидкости трупа).
Получают хлороформную
вытяжку смеси лекарственных ядов, присутствующих в биоматериале.
|
2.Идентификация
(предварительные испытания):
разделение смеси
лекарственных ядов на группы
|
2.Проводят ТСХ хлороформной
вытяжки, используя общий элюент и общий стандарт.
Разделяют смесь ядов на
группы по величине параметра удерживания Rs(cоотношение
параметров Rf вещества и стандарта).
|
3.Идентификация
(предварительные
испытания):
разделение групп
лекарственных ядов на более узкие группы или на индивидуальные вещества
|
3.1. Проводят ТСХ
хлороформной вытяжки, используя общий элюент и общий стандарт.
Разделяют смесь ядов на
группы по величине параметра удерживания Rs.
3.2.Экстрагируют отдельные
группы ядов с сорбента подходящими для этих групп растворителями.
3.3. Проводят ТСХ
экстрактов, используя частные элюенты.
Разделяют смеси
лекарственных ядов на более узкие группы или на индивидуальные вещества
по величине параметра удерживания Rf .
|
4.Идентификация
(подтверждающие испытания в
случае положительных результатов по п.3)
|
4.1.Упаривают растворитель
из хлороформных вытяжек и проводят реакции с общеалкалоидными
осадительными, специальными реактивами и другие цветные и осаждающие
реакции**, микрокристаллоскопические реакции***.
4.2.Проводят ТСХ разделение
хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем исследуют их
методами:
- УФ-
спектрофотометрии
- ИК-спектроскопии
- Хроматографии.
(ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ, электрофорез).
4.3. Проводят ТСХ
разделение хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем
исследуют их методом фармакологических (физиологических) проб.
|
5.Количественное
определение индивидуальных ядов, выделенных из биоматериала, с целью
оценки их доз, поступивших в организм
|
5.Проводят ТСХ разделение
хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем испытывают их
методами:
- фотоколориметрии
- Спектрофотометрии
- ГЖХ..
|
*Описаны в предыдущей лекции.
**Реакции выполняют методом капельного
анализа. Метод состоит в том, что исследуемый раствор и растворы
реактивов отмеряются одной или несколькими каплями; реакции проводят на
инертных подложках и (или) фильтровальной бумаге.
***Основываются на осаждении
исследуемых веществ и определении размера и формы образовавшихся
кристаллов.
Схема
ненаправленного
химико-токсикологического исследования биологических жидкостей
Стадия
|
Метод
и процедура
|
1.Изолирование
лекарственных ядов
|
1.Используют один из общих
методов изолирования из биологических жидкостей.
Получают хлороформную
вытяжку смеси лекарственных ядов, присутствующих в биоматериале
|
2.Идентификация
(предварительные испытания):
разделение смеси
лекарственных ядов на группы
|
2.1.Проводят ТСХ
хлороформной вытяжки, используя общий элюент и общий стандарт.
Разделяют смесь ядов на
группы по величине параметра удерживания Rs (cоотношение
параметров Rf вещества и стандарта).
2.2.В случаях недостаточной
чувствительности ТСХ используют ГЖХ и ВЭЖХ.
|
3.Идентификация
(предварительные
испытания):
разделение групп
лекарственных ядов на более узкие группы или на индивидуальные вещества
|
3.1. Проводят ТСХ
хлороформной вытяжки, используя общий элюент и общий стандарт.
Разделяют смесь ядов на
группы по величине параметра удерживания Rs.
3.2.Экстрагируют отдельные
группы ядов с сорбента подходящими для этих групп растворителями.
3.3. Проводят ТСХ
экстрактов, используя частные элюенты.
Разделяют смеси
лекарственных ядов на более узкие группы или на индивидуальные вещества
по величине параметра удерживания Rf .
3.4.В случаях недостаточной
чувствительности ТСХ используют ГЖХ и ВЭЖХ.
|
4.Идентификация
(подтверждающие испытания в
случае положительных результатов по п.3)
|
4.1.Проводят ТСХ разделение
хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем исследуют их
методами:
- УФ-
спектрофотометрии
- ИК-спектроскопии
- Хроматографии.
(ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ, электрофорез).
4.2. Проводят ТСХ
разделение хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем
исследуют их иммунохимическим методом.
|
5.Количественное
определение индивидуальных ядов, выделенных из биологических жидкостей, с
целью оценки их доз, поступивших в организм
|
5.Проводят ТСХ разделение
хлороформных вытяжек, очистку полученных экстрактов и затем испытывают их
методами:
-
фотоколориметрии
- Спектрофотометрии
- ГЖХ
- Иммунохимическим.
|
|
|