Методы реакционной ГЖХ - все методы, использующие доколоночные химические реакции исследуемых компонентов с последующим ГЖХ - анализом продуктов превращения. Соответствующие реакции должны протекать быстро (менее 10 мин), количественно (без образования побочных продуктов), а продукты превращений должны легко выделяться из реакционной смеси и быть полностью пригодными для анализа. Например, такой продукт может иметь значительно более высокое давление пара по сравнению с исходным веществом.
Все токсические вещества, которые относят к летучим ядам, включая элементоорганические (например, ТЭС), а также их смеси можно анализировать методом ГЖХ.
Выбор метода ГЖХ, а также конкретных условий ГЖХ - анализа определяется двумя факторами:
1) составом анализируемого обьекта;
2) поставленной аналитической задачей.
Анализ водных растворов органических веществ и, в частности, водных растворов летучих ядов (биологические жидкости, дистилляты) вызывает серьезные трудности, т.к. вода из-за своего дипольного характера и связанных с этим адсорбционных эффектов по отношению к твердому носителю очень медленно выходит из хроматографической колонки. В результате пики воды характеризуются сильным образованием «хвостов» (рис), которые полностью или частично перекрывают пики растворенных веществ. Кроме того, при использовании катарометра и газа-носителя – азота пик воды и пики других веществ записываются по разные стороны. Проблему анализа водных растворов снимают методы реакционной ГЖХ.
В 1960 г. Драверт, Купфер и Фельгенхауэр предложили использовать реакционную ГЖХ для прямого количественного анализа одно- и двухатомных спиртов в водных растворах, а также специально для прямого количественного определения этилового спирта в крови и метилового спирта в винах и водках. Спирты предложено переводить в кислой среде (добавка винной кислоты) в чрезвычайно летучие эфиры азотистой кислоты или в олефины и в соответствующие углеводороды. Однако две последние реакции, несмотря на их высокую чувствительность, имеют ряд ограничений, поэтому в настоящее время не применяются.
Примеры других групповых доколоночных реакций.
- этерификация калия этилсульфатом,
- этерификация тетраметиламмониевыми солями.
-образование метиловых эфиров путем разложения фенолятов тетраметиламмония.
Количественный анализ этилового спирта в биологических жидкостях
методом ГЖХ
Условия анализа:
- хроматографическая колонка из нержавеющей стали длиной 1 м и внутренним диаметром 6 мм;
- неподвижная фаза: ПЭГ с М.м. 1000 – 1500, 12 %;
- твердый носитель: сферохром-1 или сферохром-2, сферохром-3;
- температура хроматографической колонки и детектора: 75 оС;
- газ-носитель: технический азот, расход: 50 –60 мл/мин.
- детектор: катарометр;
- обьем газообразной пробы: 3 мл.
Этиловый спирт превращают в этилнитрит, используя в качестве реагентов 50 %-ный раствор кислоты трихлоруксусной и 30 %-ный раствор натрия (калия) нитрита:
C 2H 5OH + CCl 3 COOH + KNO2 C 2H 5ONO + CCl 3COOK + H 2O
По окончании реакции газообразную фазу реакционной смеси используют для ГЖХ-анализа.
В качестве внутреннего стандарта используют пропиловый (или изопропиловый) спирт. Этиловый спирт, содержащийся в биологическом материале, и добавленный к биологическому материалу пропиловый спирт переводят в этил- и пропилнитрит соответственно. Расчет содержания этилового спирта осуществляют по калибровочному графику. При определении этилового спирта в крови концентрацию этилового спирта, определенную по калибровочному графику умножают на 0,95, в моче – на 1,05.
Калибровочный график строят следующим образом.
- В качестве эталонного вещества используют 95 %-ный этиловый спирт.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.