Разделение происходит вследствие частого перехода молекул отдельных компонентов смеси между двумя фазами, из которых одна является неподвижной фазой с развитой поверхностью, а вторая фаза (подвижная) перемещается относительно нее.
Благодаря различному распределению разделяемых веществ между неподвижной и подвижной фазами они испытывают разное замедление в своем движении вдоль колонки.
Анализ проводят при постоянной температуре или в соответствии с заданной температурной программой.
Детектор должен обеспечить определение тех количеств анализируемых веществ, которые элюируются из колонки. Обычно детектирование основано на эффектах ионизации в пламени (пламенно-ионизационный детектор), теплопроводности (катарометр), термоионном эффекте или на эффекте захвата электронов.
Идентификацию проводят, используя параметры удерживания: время удерживания или относительное время удерживания (соотношение времен удерживания анализируемого и стандартного веществ). Обычны способы идентификации, которые состоят в сравнении:
1)параметра удерживания анализируемого вещества в испытуемой пробе и пробе сравнения;
2)хроматограммы испытуемой пробы с хроматограммой пробы сравнения.
Количественное определение проводят двумя способами: абсолютной калибровки и методом внутреннего стандарта.
Абсолютная калибровка. Испытуемую пробу и пробу сравнения попеременно хроматографируют, получая не менее 5 хроматограмм. Рассчитывают средние значения площадей или высот пиков анализируемого вещества. По полученным средним значениям рассчитывают концентрацию анализируемого вещества в испытуемой пробе.
Метод внутреннего стандарта. Для каждой хроматограммы сначала рассчитывают отношение площади или высоты пика анализируемого вещества к площади или высоте пика внутреннего стандарта. Полученные отношения усредняют для испытуемой пробы и пробы сравнения и по найденным средним значениям определяют концентрацию анализируемого вещества в испытуемой пробе.
В методике, основанной на методе ГЖХ, рекомендуется указывать следующие условия анализа:
- размеры хроматографической колонки и материал, из которого она изготовлена;
- тип неподвижной фазы и ее количество на носителе в % к массе носителя;
- тип твердого носителя и размер его частиц;
- температуру хроматографической колонки, испарителя и детектора;
- газ-носитель и его расход;
- тип детектора;
- обьем пробы.
Для количественного определения необходимо выполнение следующих условий:
- инертность твердого носителя по отношению к определяемому веществу;
- симметричный хроматографический пик определяемого вещества с профилем, отвечающим гауссовской кривой распределения;
- постоянство условий ГЖХ-анализа;
- линейность показаний детектора в завимости от дозированного количества определяемого вещества.
В стандартных методиках ГЖХ - анализа органических веществ обычно используют следующие условия:
- хроматографическую колонку из нержавеющей стали или меди, алюминия, стекла, кварца, политетрафторэтилена длиной от 1 до 3 м и внутренним диаметром от 3 до 8 мм;
- оптимальную для данной методики неподвижную фазу (5 –15) %;
- твердый носитель с размером частиц 0,15 –0,50 мм;
- газ-носитель: азот или гелий, аргон;
- детектор: ПИД или катарометр;
- обьем пробы: 0,005 –0,1 мл (жидкая проба), 0,5-20 мл (газообразная проба).
Неподвижную фазу выбирают, руководствуясь следующими основными требованиями к ней:
1) селективность;
2) химическая стабильность в условиях анализа;
3) доступность.
Методы реакционной ГЖХ
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.