*В случае гнилостных изменений биоматериала образуются неразделяемые эмульсии, что исключает возможность применения указанного метода изолирования в анализе на яд.
Степень измельченности биоматериала
Степень экстракции ядов возрастает при увеличении степени измельченности, в частности, в результате проведения циклов: замораживание-размораживание.
Однако, при этом также возрастает степень экстракции примесей, что вызывает осложнение очистки вытяжек.
Величина рН среды
Установлено, что соединения белков с азотсодержащими основаниями (большинство алкалоидов) разлагаются кислотами при рН = 2 –3. Этот факт является основанием для выбора оптимального диапазона рН кислых экстрагентов, с помощью которых осуществляют изолирование алкалоидов и др. органических оснований из биоматериала.
Однако, при рН = 2 –3 также возрастает степень экстракции примесей, что вызывает осложнение очистки вытяжек.
Например, в клетках трупов содержится относительно большое количество воды. Эта вода мешает проникновению не смешивающихся с ней растворителей. Поэтому такие растворители не пригодны для изолирования ядов из органов трупов.
Наиболее подходящими по растворяющей способности по отношению к лекарственным ядам являются амфифильные растворители. Однако, при использовании этих растворителей также возрастает степень экстракции примесей, что вызывает осложнение очистки вытяжек.
Например, при действии подкисленной жидкости на яды, находящиеся в биоматериале, они превращаются в соли соответствующей кислоты. Чем лучше подобрана кислота, тем лучше растворяются соли в подкисленной жидкости, тем легче изолируются яды из биоматериала.
На растворимость белковых веществ влияет ионная сила растворов, которая зависит от концентрации электролитов в этих растворах. Влияние ионной силы электролитов на растворимость белковых веществ отражает рис.
При низких концентрациях электролиты повышают растворимость многих белковых веществ. С повышением концентрации электролитов растворимость белков уменьшается, а при дальнейшем добавлении этих солей белковые вещества могут выпасть в осадок (эффект высаливания).
Методы очистки вытяжек из биоматериала от примесей
Необходимы для очистки от примесей, экстрагируемых из биоматериала одновременно с ядами.
Многие продукты гниения биоматериала дают те же реакции, что и яды. Поэтому при исследовании на наличие ядов необходима тщательная очистка вытяжек от примесей, которые являются продуктами гниения обьектов биологического происхождения.
Фильтрование и центрифугирование
Если твердые примесные частички проходят через поры фильтра и материал фильтра существенно адсорбирует яд, то вместо фильтрования используют центрифугирование.
Осаждение примесей
Метод отделения примесей с использованием осаждающих реакций или физико-химических процессов.
К реактивам, осаждающим белковые вещества, относятся кислоты: трихлоруксусная, вольфрамовая, метафосфорная и др.
Ø При повышении температуры происходит денатурация белков, снижается их растворимость и белки выпадают в осадок.
Ø При добавлении к водным вытяжкам органических растворителей, которые смешиваются с водой, или неорганических солей (в достаточной концентрации) снижается растворимость белков (эффект высаливания) и они выпадают в осадок. Высаливание является одним из эффективных методов осаждения примесей из вытяжек, полученных настаиванием гниющего материала с подкисленной водой.
Ø При изоэлектрическом значении рН между молекулами белка отсутствует электростатическое отталкивание, молекулы слипаются и белок выпадает в осадок.
Экстракция примесей органическими растворителями
Наиболее часто применяемый метод. Условия экстракции, лимитирующие ее степень:
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.