В настоящее время лабораториях используются несколько надежных методов для идентификации различных типов клеток нормальной лимфоидной ткани и их опухолевых аналогов. Такие методы направлены на лучшее понимание природы злокачественных лимфом и их разумную классификацию. Они включают классическую морфологию, гистохимию, иммуногистохимию, проточную цитометрию и молекулярные методы, типа полимеразной цепной реакции (ПЦР), гибридизации in situ и ДНК клонирование. Морфология - основа экспертизы злокачественного процесса. Хотя морфология может использоваться, чтобы точно идентифицировать только некоторые типы клеток (например, плазматические клетки), в большинстве случаев это может давать существенную информацию относительно B или T-клеточной природы лимфомных клеток. Неблагоразумно использовать более сложные методы исследования лимфом, когда им не предшествуют традиционные морфологические методы, которые являются более простыми, недорогими и обладают существенными возможностями. Цитохимический и гистохимический (криостатный или парафиновые срезы) методы окраски полезны для дифференциального анализа. Кислая фосфатаза, неспецифическая эстераза, хлороацетат-эстераза и терминальная деоксинуклеотидил трансфераза (TdT) - наиболее ценные показатели. Важно не только простое наличие фермента, но также и характер их внутриклеточного распределения. Например, кислая фосфатаза и кислая эстераза тонко гранулированы в B-клетках и диффузно рассеяны в гистиоцитах. Т-лимфоциты имеют фокусное, пятнистое распределение обоих ферментов. В частности, кислая фосфатаза присутствует в лимфоидных клетках центральных лимфоидных органов (например тимоциты) и в периферических лимфоцитах, в то время как кислая неспецифическая эстераза характеризует только периферические Т-лимфоциты и главным образом CD4 положительные хелперы. Хлороацетат-эстераза положительны клетки гранулоцитарного и тучные клетки. TdT характеризует лимфоидные клетки тимусной и претимусной стадии, также как и пре-В тип. Классическое окрашивание ферментов применяется всё меньше и меньше, и вытесняется использованием моноклональных антител или против ферментов или, что более важно, против эпитопов, характеризующих различные категории клеток лимфоцитарного, моноцитарного или миелоцитарного ряда. Наиболее важны в дифференциальном плане для злокачественных лимфом – иммуногистохимическое выявление поверхностных или цитоплазменных маркеров: иммуноглобулинов, ферментов типа TdT, лизозима и эластазы лейкоцитов, а также антигенов, характеризующих иммуногистохимические различия популяций клеток (например кластеры дифференцировки лимфоцитов, антигены, специфичные для T или B-клеток, антигены моноцитов / гистиоцитов, HLA-антигены, антигены IL-2R, TCR и т.д). Постоянно появляются новые моноклональные антитела для отдельных субпопуляций клеток, типа фолликулярных средних лимфоцитов, фолликулярные дендритные клетки (FDRC), интердигитальные клетки ретикулярной ткани и т.д.
Даже с использованием различных специфичных моноклональных антител некоторый процент от злокачественных лимфом остается негативным и для B и для Т-клеточных маркеров, так называемые «ноль-клеточные» лимфомы. Использование молекулярных методов оказывает существенную помощь в таких случаях. Фактически, анализ генной реарранжировки показал, что многие злокачественные «ноль-клеточные» лимфобластные лимфомы имеют генную реарранжировку иммуноглобулинов, в то время как значительное число «нулевых» крупноклеточных лимфом имеют реарранжировку Т-клеточных рецепторов. Гибридизация in situ полезна для выявления специфической РНК или ДНК, соответствующих клеточным или вирусным компонентам (Igs-RNA, EBER и EBNA для EBV и т.д.). Важно, что ПЦР и гибридизация in situ может применяться в парафиновых срезах. Кроме того, ПЦР может использоваться, чтобы повысить чувствительность гибридизации in situ в парафиновых срезах.
В течение немногих последних лет были предприняты несколько более или менее успешных попыток классифицировать лимфомы. Две классификации наиболее распространены, это: Кильская классификация и т.н. международная рабочая формулировка. Обе классификации лучше применять к злокачественным лимфомам лимфатических узлов, так как экстранодальные лимфомы часто имеют существенные особенности в их морфологии, фенотипе, генотипе и клиническом течении. Это относится к лимфомам желудочно-кишечного тракта и так называемым MALT-лимфомам вообще, лимфомам кожи, крупноклеточным лимфомам средостения и лимфомам носовых полостей .
Обе классификации, имеют преимущества и недостатки. Кильская классификация имеет преимущества: а) Соединение морфологии и иммунологии для различия B и Т-клеточных лимфом;
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.