Цитохимия.
Рутинное использование панели цитохимических окрасок - необходимый минимум в типировании лейкозных клеток, который важен для выделения ОМЛ и ОЛЛ. Известно, что лейкозные клетки сохраняют основные признаки своих нормальных аналогов. Суть цитохимических исследований заключается в выявлении клеточных компонентов (прежде всего, ферментов), характерных для тех или иных клеточных типов в норме. В процессе цитохимической реакции происходит взаимодействие находящегося в клетке фермента или иного вещества с реагентами рабочего раствора; в ходе реакции субстрат либо меняет окраску, либо окрашивает искомую субстанцию в клетке. Sudan black B (SBB), миелопероксидаза (MPO) и эстеразы (хлорацетат и неспецифическая) положительны при ОМЛ и отрицательны при ОЛЛ. Таким образом, (1) либо SBB, либо MPO предполагают один из четырех типов ОМЛ - М1, М2, М3 и М4; (2) неспецифические эстеразные реакции, обычно, альфа-нафтил ацетат-эстераза (АNАE) или альфа-нафтил бутират эстераза (АNBE), или нафтол-AS ацетат эстераза (NАSА) характерны (в виде диффузной реакции при моноцитарных лейкозах, М4 и М5); ANAE всегда положительна и при М6 и М7 вариантах ОЛ. Все эти реакции чувствительны к ингибированию фторидом натрия (FN).
Другие цитохимические методы несут дополнительную информацию: нафтол-AS хлорацетат эстераза (NASCA), положительна при М1, М2, М3; кислая фосфатаза (AP) типична в случаях Т-ОЛЛ, а также при М6 и М7, при М5 отмечается диффузная реакция; гранулярная PAS реакция обычно позитивна при ОЛЛ; и, цитобактериальный тест на лизоцим, который положителен при М4 и М5 вариантах, но может быть отрицательным при М5а (этот тест коррелирует с результатами исследования лизоцима в сыворотке), определение повышенного уровня лизоцима является полезным дополнительным тестом в определении моноцитарного компонента в случаях М4 с низким числом моноцитов и картиной аспирата, ошибочно интепретируемой как М2.
Цитохимической реакцией, подтверждающей диагноз ОЛЛ являются PAS и кислая фосфатаза. Однако положительная PAS и кислая фосфатаза могут наблюдаться при ОМЛ-М5 и ОМЛ-М7-вариантах. Следовательно, дополнительные реакции на пероксидазу и ацетат эстеразу должны быть отрицательными для подтверждения ОЛЛ.
Эти методы не всегда являются рутинными во многих лабораториях, поскольку с появлением МоАТ, необходимых для иммунологической классификации ОЛЛ и некоторых типов ОМЛ (например, М0), роль цитохимических методов уменьшилась.
Лишь в очень небольшой части случаев (около 5%), которые негативны в большинстве цитохимических тестов и не имеют характеристик вариантов от М1 до М7, устанавливается диагноз М0; при этом клетки не реагируют с МоАТ к В- или Т- линиям ОЛЛ и реагируют, как минимум, с одним анти-миелоидным МоАТ и демонстрируют пероксидазную активность на ультраструктурном уровне (см. ниже).
От 5 до 10% лейкозов не имеют типичных для ОМЛ и ОЛЛ признаков или имеют гибридные или бифенотипические характеристики в одном или нескольких клонах. Менее 5% острых лейкозов взрослых составляет так называемый бифенотипический вариант ОЛ, при котором цитохимически выявляются признаки как ОМЛ, так и ОЛЛ.
Таблица 3. Цитохииия ОМЛ и ОЛЛ.
(вставить Таблицу!!!!!!!!!!!!!!!)
----------------------------------
* Положительна только при наличии миелобластного компонента
** Обычно FN чувствительна
*** При Т-ОЛЛ (включая пре-Т-ОЛЛ с отрицательным Е-розеткообразованием)
**** Не при Т-ОЛЛ; обычно при сОЛЛ и чаще у детей
Электронная микроскопия.
Электронная микроскопия (ЭМ) обеспечивает более детальное изучение бластных клеток, выявляя структуры, не видимые при световой микроскопии. Используется для уточнения варианта ОЛ (полезна не менее чем в 5% случаев морфологически верифицированных вариантов ОЛ).
ЭМ помогает в выделении типов ОЛЛ (L1, L2, L3). В случае редкого варианта ОМЛ (М2-Базо), при некоторых вариантах бластного криза ХМЛ ЭМ помогает в выявлении специфичных базофильных гранул.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.