Методические указания по учебно-исследовательской работе студентов (УИРС), страница 16

Методика измерения  оптической  плотности

 и коэффициента светопропускания

с применением ФЭК.

    ФОТОЭЛЕКТРОКОЛОРИМЕТР (ФЭК)  предназначен  для  измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов как абсолютным методом, т. е. по отношению к растворителю, так и относительным методом, т. е. к эталонному раствору.

    При помощи этого прибора измеряют также светорассеивание взвесей,  эмульсий  и коллоидных растворов в проходящем свете.  Питание прибора производится от сети переменного тока (220 В, 50 Гц), через специальное питающее устройство, входящее в комплект прибора.

Подготовка к работе:

    1. Колориметр включить в сеть за 15 мин. до начала измерений. Во время прогрева кюветное отделение должно быть открыто (при этом  шторка  перед  фотоприемником перекрывает световой пучок).

    2. Ввести необходимый по роду измерения цветной светофильтр.

    3. Установить минимальную чувствительность колориметра.  Для этого ручку  ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ установить в положение "1", ручку УСТАНОВКА 100 ГРУБО - в крайнее левое положение.

    4. Перед  измерениями  и  при  переключении фотоприемников проверить установку стрелки колориметра на "0" по шкале коэффициентов пропускания Т при  открытом  кюветном отделении. При смещении стрелки от нулевого положения, ее подводят к нулю с помощью потенциометра НУЛЬ, выведенного под шлиц.

    Измерение оптической плотности (коэффициента пропускания):

    1. В  световой  пучок поместить кювету с растворителем или контрольным раствором, по отношению к которому производятся измерения.

    2. Закрыть крышку кюветного отделения.

    3. Ручками ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ и УСТАНОВКА 100 ГРУБО и  ТОЧНО  установить  отсчет 100  по шкале колориметра.  Ручка ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ может находиться в одном из трех положений:"1", "2" или "3".

    4. Затем ручку кюветы с растворителем или контрольным раствором заменить кюветой с исследуемым раствором.

    5. Снять отсчет по шкале колориметра, соответствующий коэффициенту пропускания исследуемого раствора в процентах.  Для регистрирующего прибора типа М90710 отсчет снять  по  шкале коэффициентов пропускания Т в процентах или по шкале D в единицах

оптической плотности.

    6. Измерение  проводить  3-5  раз и окончательное значение измеренной величины определить как среднее арифметическое из полученных значений.

СОДЕРЖАНИЕ

		Стр
1.	Введение………………………………………………...	3
2.	Цель и задачи исследования…………………………...	3
3.	Объект исследования…………………………………...	4
4.	Порядок выполнения работы…………………………..	4
5.	Методы исследования…………………………	4
5.1.	Определение относительной молекулярной массы белков методом гель-фильтрации.………………….	4
5.2.	Исследование аминокислотного состава белка………	8
5.2.1.	Ксантопротеиновая реакция…………………………...	8
5.2.2.	Реакция Милона……………………………………….	9
5.2.3.	Реакция Адамкевича……………………………………	10
5.2.4.	Реакция с ω-оксиметилфурфуролом………….……….	11
5.2.5.	Реакция Фоля……………………………………………	11
5.2.6.	Реакция Сакагучи……………………………………….	12
5.3.	Исследование степени расщепления белка…………...	13
5.3.1.	Методика определения азота формольно-титруемых аминогрупп по Черногорцеву………………………….	14
5.3.2.	Методика определения тирозина модифицированным методом Лоури………………………………………….	15
5.4.	Определение специфичности действия фермента……	16
	Определение ФТА по Черногорцеву…………………..	19
	Определение ФТА по Зеренцу…………...…………….	20
5.5.	Определение рН-оптимума исследуемого фермента...	21
5.6.	Определение температурного оптимума исследуемого фермента………………………………...	23
5.7.	Исследование кинетики ферментативных реакций………………………………………….……….	24
5.8.	Определение степени ингибирования фермента­тивной реакции в зависимости от дозы введенного ингибитора………………………………………………	26
6.	Перечень рекомендуемой литературы………………...	31
7.	Приложения…………………………………….……….	32