Результаты реакции гемагглютинации зависят от ряда факторов: видовой и индивидуальной чувствительности эритроцитов, используемых в реакции, процентного содержания их во взвеси (чем меньше процент эритроцитов, тем чувствительнее реакция), температуры, при которой протекает реакция, и рН среды (оптимальная зона рН 6,0-8,0). Поэтому необходимо всегда ставить реакцию гемагглютинации в стандартных условиях.
Реакция гемадсорбции. Реакцию применяют для индикации в зараженных культурах клеток вируса, обладающего гемагглютинирующей активностью. Сущность реакции заключается в том, что на поверхности клеток, зараженных вирусами, адсорбируются эритроциты, чувствительные к гемагглютинирующему действию вирусов in vitro. Так, например, на клетках, зараженных вирусом натуральной оспы, адсорбируются эритроциты кур, вирусом кори – эритроциты обезьян, аденовирусами – обезьян и крыс и т. д.
Методика реакции гемадсорбции следующая. Из 1-2 пробирок с зараженными и незараженными культурами клеток удаляют питательную среду и вносят по 0,2 мл 0,4 % взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия трижды отмытых эритроцитов, чувствительных к гемагглютинирующему действию предполагаемого вируса. Пробирки оставляют в наклонном положении на 20-30 мин при 37°, 22° или 4°С. Затем пробирки осторожно встряхивают и просматривают под малым увеличением микроскопа. На клетках, зараженных вирусом, адсорбируются эритроциты в виде частокола, различного вида скоплений и т. д. У одних вирусов реакции гемадсорбции становится положительной до видимого проявления цитопатических изменений в культурах клеток (вирус гриппа, парагриппа), у других – только при развитии хорошо выраженных цитопатических изменений (вирусы натуральной оспы, кори и др.). Адсорбция эритроцитов на зараженных клетках тем интенсивнее, чем в большей степени выражена специфическая дегенерация клеток, что зависит от их чувствительности к инокулированному вирусу, его дозы и времени размножения. Можно добавлять стерильно взятые и отмытые эритроциты непосредственно в питательную среду инфицированных культур и в процессе их инкубации проводить наблюдение за адсорбцией эритроцитов. В этом случае в связи с происходящим лизисом эритроцитов их необходимо периодически повторно вносить в культуры клеток.
Серологические методы.
Методы идентификации вирусов с помощью реакции торможения гемагглютинации, задержки гемадсорбции, связывания комплемента и нейтрализации см. раздел «Серологические методы исследования».
Серологические реакции применяют в двух направлениях.
1.Обнаружение с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого. В этом случае из двух компонентов реакции (антитела, антиген) неизвестным является сыворотка крови (антитела). Поэтому такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными антигенами.
При серологической диагностике бактериальных инфекций в качестве антигенов применяют взвеси живых или убитых микробов, экстракты или изолированные химические фракции из них.
Для диагностики вирусных инфекций в качестве антигенов используют аллантоисную, амниотическую жидкость, суспензии хорион-аллантоисных оболочек и желточных мешков куриных эмбрионов, жидкую фракцию клетки (экстракт) тканевых культур, гомогенаты их органов животных, зараженных определенными вирусами.
Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, гомологичных примененному антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.
Достоверные результаты серологической диагностики получают при изучении «парных» сывороток крови больных, взятой в первые дни болезни и через разные промежутки времени от начала заболевания. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и большее повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.