Гемагглютинирующая активность вирусов может подавляться не только специфическими антителами, но и неспецифическими термолабильными и термостабильными ингибиторами, содержащимися в нормальных сыворотках человека и животных или появляющимися при длительном хранении сывороток в жидком состоянии на холоду.
Для освобождения от термолабильных ингибиторов сыворотки, используемые в РНГА. Для освобождения от термостабильных ингибиторов применяют различные методы обработки в зависимости от видовой принадлежности сыворотки и типа вируса, используемого в реакции торможения гемагглютинации.
Реакция торможения (задержки) пассивной гемагглютинации (РТПГА). В реакции задержки пассивной гемагглютинации участвуют три компонента: иммунная сыворотка, антиген (испытуемый материал) и сенсибилизированные эритроциты.
Если в исследуемом материале не содержится антиген, специфически реагирующий с антителами иммунной стандартной сыворотки, то последняя сохраняет способность агглютинировать сенсибилизированные эритроциты. Если же такой антиген в исследуемом материале присутствует, он связывает антитела иммунной (стандартной) сыворотки, и при последующем добавлении эритроцитов, сенсибилизированных антигеном, гомологичным сыворотке, гемагглютинация не наступает.
Реакция нейтрализации антител или антигена (РНАТ или РНАГ). Эта реакция, так же как и РТПГА, трехкомпонентная, и компоненты те же, но она имеет ряд преимуществ: в ней могут участвовать не только антигены, но и гаптены. Кроме того, реакция нейтрализации лишена зональности. На ее результат не влияет избыток антигена или антител.
Реакция проходит в два этапа. На первом готовят двукратные разведения исследуемого материала, содержащего искомые антиген или антитела. Если на первом этапе антиген нейтрализовал антитела, эритроциты не агглютинируются – реакция отрицательная, если же антитела не соответствуют первому антигену, то эритроциты агглютинируются – реакция положительная.
Реакция преципитации. Реакция преципитации относится к простым и ускоренным серологическим реакциям при бактериальных инфекциях, отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Для постановки реакции преципитации необходимо: 1) испытуемая сыворотка для обнаружения специфических антител или иммунная сыворотка при идентификации выделенных микробов; 2) антиген – экстракт, полный антиген или гаптен соответствующей культуры; 3) изотонический раствор хлорида натрия; 4) тонкие пастеровские пипетки; 5) преципитационные пробирки и штативы к ним.
Реакция связывания комплемента. Реакция связывания комплемента (РСК) применяют для обнаружения соответствующих антител при бактериальных и вирусных инфекциях, а при последних также для типирования вирусов. Реакция связывания комплемента относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвует, кроме антигена и антител, еще гемолитическая система, выявляющая результат реакции. Последняя протекает в две фазы: первая фаза – взаимодействие антигена с антителами с участием комплемента, вторая фаза – выявление степени связывания комплемента, что достигается добавлением гемолитической системы (эритроциты + гемолитическая сыворотка).
Для диагностики вирусных инфекций в основном используют ту же методику подготовки ингредиентов и постановки реакции, которая принята в бактериальной практике. Некоторые отличия связаны с приготовлением вирусных антигенов и титрованием комплемента. РСК ставят в объеме 1 мг на холоду.
В РСК с целью типирования вирусов лучше всего использовать иммунные сыворотки морских свинок, которые не обладают антикомплементарными свойствами.
Список литературы.
Н. А. Бакулина, Э. Л. Краева «Микробиология», Москва, 1980 г.
Л. В. Левицкая «Микробиология с основами лабораторной диагностики», Москва, 1976 г.
М. О. Биргер «Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования», Москва, 1982 г.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.