В условиях экспедиционной работы, когда нет возможности поставить серологические реакции на месте, можно прибегнуть к методу «сухой капли». На сложенную вдвое фильтровальную или писчую бумагу наносят 0,1-0,5 мл сыворотки без примеси эритроцитов. Предварительно на бумаге надписывают фамилию больного, дату взятия и количество сыворотки. Сыворотку высушивают при комнатной температуре. Бумагу с высохшей сывороткой складывают в виде пакетика для порошка, который вкладывают в конверт. В лаборатории бумагу нарезают ножницами и опускают в пробирку, куда добавляют изотонический раствор хлорида натрия до разведения 1:50. Из этого исходного разведения делают последующие, и в дальнейшем постановка реакции ничем не отличается от обычной.
Посуда для серологических реакций должна быть чистой и сухой, стерилизация для нее обязательна. Пробирки, пипетки не следует помещать в растворы сулемы, карболовой кислоты, формалина, кислот и щелочей. Стекло кипятят в простой воде, а пипетки затем просушивают в этиловым спиртом и эфиром.
Реакция гемагглютинации. В основе реакции прямой гемагглютинации лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. Поскольку это происходит без участия иммунной сыворотки, реакция не является серологической. В серологических исследованиях реакцию прямой гемагглютинации применяют для выбора рабочего разведения рабочего антигена используемого в реакции торможения гемагглютинации. В основе последней лежит задержка гемагглютинирующего действия антигена специфической сывороткой.
Реакции непрямой гемагглютинации (пассивная гемагглютинация) наступает в том случае, когда к эритроцитам, сенсибилизированным антигеном, т. е. Несущим на себя адсорбированный антиген, добавляют иммунную сыворотку, соответствующую антигену. Эта реакция часто превосходит по чувствительности и специфичности другие серологические методы, ее применяют при инфекции, вызванных бактериями и риккетсиями.
Для постановки указанных реакций требуется: 1) растворимый антиген; 2) эритроциты; 3) испытуемая или стандартная иммунная сыворотка; 4) изотонический раствор хлорида натрия (0,85 % раствор химически чистой поваренной соли рН 7,2-7,4); 5) пипетки градуированные и пастеровские; 6) пластинки с лунками из органического стекла или агглютинационные пробирки и штативы к ним.
В реакциях используют эритроциты животных (баран, обезьяна, морская свинка), птиц (петух, гусь), человека – 1(0) группы. Кровь собирают в стерильную банку со стеклянными бусами и дефибринируют путем встряхивания в течении 10-15 мин или немедленно смешивают с равным объемом антикоагулянта. В качестве последнего используют 2,5 % раствор цитрата натрия или модифицированный раствор Олсвера (глюкозы 2,5 %, хлорида натрия 0,42 %, цитрата натрия 0,83 %; рН 6,4). Взвесь эритроцитов можно хранить в этом растворе при 4°С 2-3 недели. Для использования в реакциях осадок эритроцитов отмывают 3 раза 10 объемами изотонического раствора хлорида натрия. После каждого центрифугирования при 1000 об/мин в течение 10 мин надосадочную жидкость сливают и заменяют свежим изотоническим раствором хлорида натрия. Отмытые не разведенные эритроциты могут быть использованы при хранении на холоду в течение 48 ч, в виде 0,25-5 % взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия – в течение 2-6 дней (до появления гемолиза и спонтанной агглютинации эритроцитов).
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.