Обнаружение внутриклеточных включений. При вирусных инфекциях в зараженных клетках развиваются своеобразные включения. Одни инфекции сопровождаются образованием включений в цитоплазме пораженных клеток (бешенство, оспенная вакцина), другие – в цитоплазме и ядре (корь, натуральная и ветряная оспа, аденовирусные заболевания). Включения имеют различную природу, структуру, формы и размеры, колеблющиеся от 0,25 25 мкм. Согласно современным данным при одних инфекциях включения являются местом размножения вируса и представляют собой его колонии, окруженные веществами реакции клетки, при других инфекциях – это продукт дегенерации клеток.
Включения могут быть выявлены в окрашенных или обработанных флюорохромами отпечатках органов и тканей, соскобах клеток, гистологических срезах из пораженной ткани и препаратах культур клеток, инфицированных вирусами. В настоящее время метод гистологических срезов в связи с громоздкостью и длительностью приготовления препаратов используют для выявления внутриклеточных включений крайне редко, главным образом при диагностике бешенства.
Приготовление препаратов.
Отпечатки. Вырезают небольшие кусочки пораженной ткани и помещают их на фильтровальную бумагу, сложенную в четверо. Чистыми обезжиренными предметными стеклами слегка надавливают на кусочки ткани, затем стекла высушивают на воздухе.
Препараты из соскоба клеток. Скальпелем или специальной острой ложечкой осторожно отделяют клетки с пораженных участков ткани и переносят их на предметное стекло в каплю изотонического раствора хлорида натрия, можно переносить соскоб клеток и ватным тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия. Препараты высушивают на воздухе.
Окраска препаратов. Для обнаружения внутриклеточных включений применяют различные методы окраски. Универсальной является окраска по Романовскому-Гимзе в разных вариантах, выявляющая все виды вирусных включений. Для окраски этим методом препараты фиксируют в смеси Дюбоска-Бразиля-Буэна. Внутриклеточные включения при большинстве вирусных инфекций являются оксифильными и красятся по Романовскому-Гимзе в розовый или сиреневый цвет. Наряду с этим применяют окраску по Манну, которая считается классической и позволяет выявлять цитоплазматические и внутриядерные включения в клетках, зараженных различными вирусами. По Манну вирусные включения окрашиваются в ярко-красный цвет. Для выявления включений при гриппе, кроме указанных выше методов, используют окраску препаратов по Пигпревскому, Павловскому, а при бешенстве – по Муромцеву, Туревичу, Селлеру.
Флюорохромирование препаратов. Для выявления внутриклеточных включений в качестве флюорохрома применяют акридиновый оранжевый в разведении 1: 20000 – 1: 30000. Для флюорохромирования препараты готовят таким же образом, как и для обычной окраски. Можно использовать препараты нативные и фиксированные в ацетоне в течении 10-15 минут. Метод флюорохромирования и микроскопии препаратов не отличается от применяемого в бактериологии.
В препаратах, флюорохромированных акридиновым оранжевым, включения, содержащие дезоксирибонуклеиновую кислоту, дают голубовато-зеленое свечение, демонстративно выделяясь на сероватом фоне цитоплазмы, а включения, содержащие рибонуклеиновую кислоту, - красновато-оранжевое.
Выявление внутриклеточных вирусных включений при большинстве инфекций, как и вирусоскопия, является ориентировочным методом быстрой лабораторной диагностики заболевания, и только при некоторых инфекциях обнаружение включений имеет диагностическое значение.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.