Лабораторные животные и экспериментальная инфекция, страница 10

2. Установление родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). В этом случае неизвестным компонентом в реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции  с заведомо известными иммунными сыворотками. Иммунные сыворотки получают путем длительной иммунизации животных (кролики, морские свинки, крысы, реже лошади, ослы, бараны и др.) соответствующими антигенами. Иммунные сыворотки должны обладать высоким уровнем антител и специфичностью. Уровень антител определяют при постановке любой серологической реакции с разведениями сыворотки и антигена. Последнее разведение, при котором еще получается отчетливый положительный результат, называется титром сыворотки. Сыворотка может быть специфичной в пределах рода, вида, варианта (типа), и ее специфичность обусловлена тем, что она реагирует только с гомологичными культурами и не реагирует с гетерологичными.

Для серологической идентификации микробов (вирусов) диагностические сыворотки выпускают нативные (неадсорбированные) и адсорбированные. Противовирусные сыворотки освобождают от неспецифических ингибиторов. Неадсорбированные сыворотки обладают высоким титром, который у противовирусных сывороток достигает 1:2560 – 1:5120, у антибактериальных – 1:12800 – 1:25000 и выше. Недостатком этих сывороток является то обстоятельство, что они не свободны от антител к микробам, имеющим общий антиген в пределах группы, рода и семейства в результате чего они способны давать групповые реакции. Адсорбированные сыворотки отличаются строгой специфичностью, но обладает низкими титрами – от 1:40 до 1:320. Адсорбированные сыворотки применяют в основном в реакции агглютинации на стекле. Эти сыворотки не подлежат разведению.

Серологическое исследование для обнаружения при инфекционных заболеваниях специфических антител является более доступным методом лабораторной диагностики, чем выделение возбудителя. В ряде случаев положительная серологическая реакция является единственным доказательством встречи и взаимодействия организма с возбудителем соответствующего инфекционного заболевания. Поэтому серологические исследования широко применяют в эпидемиологической практике для установления природы вспышки источника инфекции.

Вместе с тем положительный или отрицательный результат серологического исследования при выделении микроба (вируса), когда отсутствует клиническая картина заболевания, позволяет в первом случае установить по ответной реакции организма наличие бессимптомного инфекционного процесса, а во втором – рассматривать выделение микроба (вируса) как кратковременное транзиторное носительство. Ряд заболеваний с исходной клинической картиной, например риккетсиозы, энтеровирусные инфекции, могут быть дифференцированы лишь серологически. Наконец, систематические серологические исследования в комплексе с другими данными могут оказать существенную помощь в прогностической оценке течения заболевания.

Для серологического исследования кровь берут натощак (во избежании хилезности, т.е. мутности сыворотки) из локтевой вены или уколом из пальца; у грудных детей делают небольшой надрез пятки оспопрививательных пером или узким скальпелем. При взятии крови необходимо соблюдать правила асептики. Кровь в количестве 5-6 мл берут в стерильную пробирку (лучше центрифужную), которую тотчас после взятия ставят на ½ - 1 ч в термостат при температуре 37°С. Образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенок стерильной стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой, после чего оставляют на 18-20 часов в прохладном месте (4-10°С). Отстоявшуюся сыворотку сливают в другую стерильную пробирку через край или лучше при помощи пастеровской пипетки с резиновым баллоном. При попадании в сыворотку примеси эритроцитов ее центрифугируют и снова сливают с осадка. Сыворотка может оставаться на сгустке не более 48 часов после взятия крови; чистая сыворотка (без примеси эритроцитов) может храниться в стерильных условиях при температуре 4-10°С до 1 мес. При необходимости сохранить сыворотку до 2-3 мес. ее следует заморозить при температуре от –20 до -70°С и хранить, избегая оттаивания. Если удается взять лишь малые количества крови, например у маленьких детей, ее набирают (градуированной пипеткой вместимостью 1 мл) в количестве 0,1-0,2 мл и вносят в пробирку, куда предварительно было налито 0,9-1,8 мл стерильно изотонического раствора хлорида натрия (лучше с содержанием 0,25 % цитрата натрия), что соответствует разведению сыворотки 1:10. Для осаждения форменных элементов полученную взвесь центрифугируют или оставляют в холодном месте до утра. Отстоявшуюся сыворотку, разведенную 1:10, переносят в чистую стерильную пробирку и делают из нее последующие двукратные разведения (1:20, 1:40, 1:80, и т.д.).