При наличии в культурах клеток специфических цитопатических изменений на 2 плюса и более проводят серологическую идентификацию выделенного вируса. Если деструкция клеток выражена слабо и интенсивность ее усиливается с удлинением времени инкубации, проводят последующие пассажи вируса. С этой целью зараженные культуры подвергают 2-3-кратному замораживанию и оттаиванию для разрушения клеток и извлечения внутриклеточного вируса. Культуральную жидкость освобождают от клеточного детрита центрифугированием при 100 об/мин 5 мин и используют для заражения свежих культур клеток. В процессе пассажей интенсивность обусловленных вирусом цитопатических изменений обычно усиливается и наблюдается более раннее их проявление.
Обнаружение внутриклеточных включений. При размножении вирусов в эпителиальных клетках и фибробластах образуются внутриклеточные включения, располагающиеся в цитоплазме или ядре пораженных клеток. Для выявления включений культуры клеток выращивают на стеклянных пластинках в пробирках, заражают вирусом и через определенные сроки инкубации культур, что зависит от свойств инокулированного вируса, готовят препараты, окрашивая их обычными красителями или флюорохромами.
Обнаружение специфического антигена. Для выявления специфического антигена в зараженных клетках препараты готовят так же, как для выявления включения, и обрабатывают по прямому или непрямому методу иммунофлюоресценции.
При отсутствии цитопатических изменений, внутриклеточных включений, специфического антигена, отрицательных гемадсорбции и гемагглютинации в культурах клеток, зараженных исследуемым материалом, проводят два последующих пассажа по описанной выше методике. При отсутствии указанных изменений в конечном пассаже результат выделения вируса считают отрицательным.
Идентификация вирусов, выделенных в культурах клеток. Для суждения о природе выделенного вируса в качестве ориентировочных критериев могут служить: характер цитопатических изменений в зараженных культурах клеток, морфология и локализация внутриклеточных включений и гемадсорбирующие свойства вируса. Точное установление типовой принадлежности выделенного вируса проводят с помощью серологических реакций. Для типирования вирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью, используют реакции торможения гемагглютинации, задержки гемадсорбции, нейтрализации с учетом результатов по гемадсорбции или РСК, а для вирусов, не обладающих этими свойствами реакцию нейтрализации цитопатических изменений, цветную пробу или РСК.
Непрямой метод иммунофлюорисценции имеет преимущество перед прямым не только как более чувствительный, но и более доступный: с помощью одной и той же антивидовой меченой сыворотки можно обнаружить различные вирусные и бактериальные антигены, применяя в каждом случае соответствующую видовую немаркированную специфическую иммунную сыворотку. Например, имея набор немаркированных специфических иммунных сывороток кроликов к различным вирусным и бактериальным антигенам и единую меченую гамма-глобулиновую фракцию сыворотки лошади, иммунизированной нормальной сывороткой кроликов, можно осуществлять лабораторную диагностику вирусных и бактериальных инфекций.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.