2. Оценка гуморальных и клеточных факторов местного (или мукозального) иммунитета. Слизистые оболочки являются входными воротами для большинства инфекций, и от функциональной активности их иммунного аппарата в значительной степени зависит развитие инфекционного процесса. Особенно очевидна значимость исследования местного иммунитета при инфекционных и аллергических заболеваниях бронхолегочного аппарата. Наш опыт оценки системного иммунитета при атопи-ческой астме показал возможность выявления только "следственных" изменений: повышения количества активированных лимфоцитов, уровня циркулирующих иммунных комплексов, изменения иммунорегуляторного индекса и др. Исследование цитокинового профиля местного иммунитета в ряде случаев позволяет выявить те изменения, которые имеют непосредственное отношение к этиопатогенезу заболевания. Так, данные литературы последних лет свидетельствуют о том, что атопическая астма и аллергический ринит являются ТП2-опосредованными заболеваниями. Исследование как лимфоцитов бронхоальвеолярного лаважа, так и биоптатов слизистой верхних дыхательных путей и носа свидетельствует о преобладании лимфоцитов, экспрессирующих мРНК для ИЛ-4 и ИЛ-5, но не для у-ИФН, эти лимфоциты продуцируют в основном указанные цитокины [13, 16, 17]. Очевидно, что анализ факторов местного иммунитета при заболеваниях бронхолегочного аппарата даст значительно больше информации об этиопатогенезе этих заболеваний, чем исследование системного иммунитета. В связи с этим создание новых методических подходов к оценке системного (мукозального) иммунитета, основанных на достижениях иммунной биотехнологии и молекулярной биологии, является важной задачей клинической иммунологии.
Разработка и внедрение в лабораторную практику новых методов иммунодиагностики тесно связаны с развитием материально-технической базы лаборатории клинической иммунологии, а именно — с наличием современного оборудования и соответствующих диагностических систем. Имеющиеся на рынке диагностические системы позволяют идентифицировать практически все параметры иммунитета. Несколько упрощая ситуацию, можно выделить 3 основные группы методов, которые используются в клинической иммунологии и в настоящее время уже становятся рутинными: ПЛЦ, иммуноферментный анализ и полимеразная цепная реакция.
Остановимся только на ПЛЦ. С помощью этой технологии можно исследовать практически все параметры иммунной системы. Для иммунологических исследований исходно ПЛЦ использовалась с целью иммунофенотипирования лейкоцитов. Действительно, применение "двойной" и "тройной" метки для идентификации Т-, В-, NK-лимфоцитов и вспомогательных клеток дает бесценную информацию не только о количественном, но и о функциональном состоянии иммунной системы. Однако на этом возможности ПЛЦ далеко не исчерпываются. С ее помощью можно анализировать: процессинг и презентацию антигена, поглощение нейтрофилами, эозинофилами и моноцитами микроорганизмов, внутриклеточный киллинг бактерий и грибов фагоцитарными клетками, образование фагоцитами активных форм кислорода и азота, наличие в цитоплазме CD4+T-клeтoк цитокинов (идентификация Thi- и ТП2-клеток), наличие растворимых цитокинов и их антагонистов в любых биологических материалах, цитотоксическую активность NK-клеток, Т-киллеров и других клеток, обладающих киллерной активностью, пролиферативный ответ лимфоцитов на Т- и В-ми-тогены, апоптоз лимфоцитов и фагоцитов.
В принципе возможности ПЛЦ безграничны. С ее помощью при наличии мноклональных антител можно идентифицировать в клетке не только цитокины, но и сигнальные молекулы, транскриптационные факторы и любые другие внутриклеточные белки. С помощью ПЛЦ можно идентифицировать и любые внеклеточные белки: комплемент, иммуноглобулины, специфические антитела, цитокины, белки острой фазы и др. ПЛЦ по крайней мере для России действительно является технологией XXI века. Высокая стоимость прибора в конечном счете полностью окупается его производительностью и многогранностью применения. Большим достижением отечественной науки будет создание проточного цитометра, способного по своей стоимости и качеству конкурировать с зарубежными аппаратами этого класса.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.