Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 5

15. Окраска жгутиков по методу Шамвелла: используют молодые 6-12-часовые культуры, выращенные на плотной питательной среде, из которых готовят суспензию. К суспензии приливают 0,5 мл стерильной теплой воды и ставят в термостат на 30-40 мин. За это время клетки переходят в воду. Каплю суспензии переносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты или парами 40% формалина 3-5 мин. Препарат обрабатывают 15 мин раствором 1, промывают раствором 2 и заливают им же на 7-10 мин. Раствор 2 сливают и мазок промывают водой. Далее препарат ополаскивают 2% водным раствором кристаллвиолета и окрашивают им же при нагревании до слабого образования паров в течение 3-5 мин. промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На препарате видны клетки бактерий, окрашенные в ярко-фиолетовый цвет со жгутиками в виде тончайших сиреневых нитей.

ЗАНЯТИЕ 4

ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ СПИРОХЕТ

План занятия

1.  Классификация спирохет

2.  Морфологические особенности возбудителей сифилиса, возвратного тифа и лептоспирозов

3.  Ультраструктура спирохет

4.  Микроскопические методы исследования спирохет

Цель занятия: Ознакомить студентов с морфологией и методами исследования спирохет

Схема 5

КЛАССИФИКАЦИЯ СПИРОХЕТ

Царство                                Procariotae

Отдел                                   Gracilicutes

Класс                                  Scotobacteriae

Порядок                              Spirochetales

Семейство                         Spirochetaceae

 

Род                    Spirocheta    Cristispira    Treponema     Borrelia       Leptospira

 

Вид                                                           T. pallidum  B. recurrentis  L.interrogans      

Методические указания к демонстрации

1. Окраска по Романовскому-Гимзе: краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини, перед использованием краску растворяют в воде (к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель продажной краски Романовского-Гимзы). На фиксированный мазок наливают раствор краски на 1 час или погружают мазок в стакан с краской, промывают водой, высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсией.

         Бледная спирохета окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, представляет собой тонкие спиралевидные клетки с 8-12 равномерными завитками, длина их 6-20 мкм, ширина 0,09-0,18 мкм.

         Боррелия рекуррентис по Романовскому-Гимзе окрашивается в сине-фиолетовый цвет, имеют форму тонкой спирали с 3-8 крупными неравномерными завитками, с одним или обоими заостренными концами, длиной 8-18 мкм и шириной 0,3-0,6 мкм.

         Лептоспира окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, в препарате видны спиралевидные микроорганизмы с 12-18 плотно прилегающими друг к другу первичными завиткими, напоминают плотную пружину или «четки» с загнутыми или утолщенными концами. Имеют вторичные завитки, придающие телу S- или С-образную форму. Длина лептоспиры 7-14 мкм, толщина 0,06-0,15 мкм.

2. Микроскопия в темном поле: ее производят при боковом освещении. Чтобы получить яркое боковое освещение, обычный конденсор заменяют специальным параболоид-конденсором, в котором центральная часть нижней линзы затемнена, а боковая поверхность зеркальная. Конденсор задерживает центральную часть параллельного пучка лучей, образуя темное поле зрения. Краевые лучи проходят через кольцевую щель, отражаются от боковой зеркальной поверхности конденсора, собираются в фокусе, и, выходя из конденсора, встречают микробные клетки в препарате «раздавленная» капля, свет от них  отражается, меняет направление и попадает в объектив. Микробные клетки при этом ярко светятся. В темном поле наблюдают живые объекты величиной 0,06-0,2 мкм, используя сухую систему (объектив х40). Иммерсионное масло наносят на верхнюю линзу конденсора, оно заполняет пространство между конденсором и предметным стеклом, на котором готовится препарат «раздавленная» капля. При этом у спирохет выявляют особенности морфологии, характер движения, количество и особенности первичных завитков, наличие вторичных завитков.

ЗАНЯТИЕ 5

ТЕМА: КЛАССИФИКАЦИЯ И МОРФОЛОГИЯ ГРИБОВ

План занятия

1.  Морфология лучистых грибов

2.  Морфология нитчатых грибов

3.  Морфология дрожжевых и дрожжеподобных грибов

4.  Использование грибов в народном хозяйстве

5.  Роль грибов в патологии человека

Методические указания к демонстрации

1. Морфология плесневых грибов (Mucor, Aspergillus, Penicillium) изучается в «раздавленной» капле. Мицелий с поверхности агара забирается бактериологической иглой, помещается в каплю воды на предметном стекле и расправляется в ней, затем капля закрывается покровным стеклом. Препарат изучается сухой системой при увеличении 10 и 40, при опущенном конденсоре. Дифференцируют указанные виды плесневых грибов по структуре плодоносящих гиф и наличию или отсутствию септ в гифах.

2. Actinomyces по  Граму окрашиваются положительно. Лучистые грибы в мазке из чистой культуры представляют однородные ветвящиеся нити одного диаметра.

3. Candida albicans по Граму окрашиваются грамположительно. Молодые клетки имеют округлую и овальную форму размером 2-5 мкм, зрелые клетки крупные, удлиненные, размером до 12-16 мкм, располагаются цепочками, образуют псевдомицелий.

Таблица 4.  Морфологические признаки плесневых грибов

Род	Мицелий		Вегетативные споры
	вегетативный	Репродуктивный	тип	расположение
Mucor	Несептирован-ный	Несептированный спорангиеносец	Эндоспоры	В спорангии
Aspergillus	Септированный	Несептированный конидиеносец	Экзоспоры (конидии)	Свободное на концах ответ-вление репро-дуктивных гиф. В виде «лейки»
Penicillium	То же	Септированный конидиеносец	То же	В виде «кисточек»