Посев по Фортнеру. Кровяной питательный агар разливают в чашки Петри толстым слоем, после застывания по диаметру агар вырезают в виде узкой щели. На одну половину чашки засевают культуру аэробного микроба, жадно поглощающего кислород (кишечную палочку, чудесную палочку), а на другую половину засевают исследуемый материал. Чашку закрывают, заливают парафином. Аэробные бактерии быстро используют кислород воздуха в герметически закрытой чашке, затем начинают размножаться анаэробы, через 24-48 часов чашку открывают и из отдельных колоний анаэробов выделяют чистую культуру.
Посев по Вейон-Виньялю в пастеровских пипетках. Пастеровские пипетки представляют собой длинные трубки (20-25 см) диаметром около 5 мм, приготовленные из легкоплавкого стекла. Один конец пипетки открыт, а другой вытянут в виде капилляра и запаян. Перед стерилизацией в широкий конец вставляют вату. Исследуемый материал разводят полужидким агаром с небольшим содержание глюкозы, затем из каждого разведения насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку, предварительно обломив запаянный конец капилляра, и избегая попадания пузырьков воздуха. Затем капилляр запаивают и пипетки помещают в термостат. Через 24-48 часов в среде можно обнаружить ясно видимые колонии бактерий в виде пушинок, комочков ваты, зерен чечевицы и т.д. Нужные колонии можно извлечь, распилив трубку.
Выделение чистых культур анаэробных бактерий
1 этап. Накопление материала.
Исследуемый материал, предварительно прогретый в течение 15 мин при 80°С для уничтожения вегетативной флоры (споры анаэробов при этом не гибнут), засевают на среду Кита-Тароцци и ставят в термостат.
2 этап. Выделение чистой культуры.
После суточного инкубирования в результате роста микробов среда мутнеет, иногда в ней видны пузырьки газа. Выделение культуры проводят или по методу Цейсслера или по методу Вейнберга.
Метод Цейсслера. Каплю материала со среды Китта-Троцц помещают в чашку с кровяным сахарным агаром, тщательно распределяют его по поверхности среды шпателем, затем этим же шпателем делают посев во второй и третьей чашке. Сутки инкубируют чашки в термостате в анаэробных условиях. На следующий день по форме колоний и морфологии микробов, изученной в мазках, окрашенных по Граму, ориентировочно определяют вид бактерий, изученные колонии пересевают на среду Кита-Тароцци для выделения чистой культуры и точного определения виды микроорганизмов.
Метод Вейнберга. 1-2 капли материала со среды Кита-Тароцци вносят в пробирку с МПБ для разведения. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, предварительно расплавленным и прокипяченным в течение 20 мин и остуженным до 50°С, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей холодной воды, при этом агар застынет и зафиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток. Инкубируют в анаэробных условиях. Через сутки отбирают колонии, на уровне колонии пробирку распиливают, колонию отсасывают пипеткой и переносят в среду Китта-Троцци для накопления и идентификации.
ЗАНЯТИЕ 10
ТЕМА: СТЕРИЛИЗАЦИЯ
План занятия
1. Понятие «стерилизация»
2. Методы и способы проведения стерилизации
3. Режим работы и устройство парового стерилизатора
4. Стерилизация текучим паром
Цель занятия: Ознакомить студентов с методами стерилизации, научить пользоваться этими методами
Методические указания к демонстрации
Стерилизация – это комплекс мероприятий, направленных на полное уничтожение вегетативных форм микробов и их спор в объектах внешней среды. Стерилизации подвергают инструменты, аппараты, лекарственные препараты, перевязочный материал и белье, питательные среды, растворы, лабораторную посуду. Стерилизацию проводят физическими и химическими методами, а также механическим путем.
Физические методы стерилизации основаны на действии ультрафиолетовых лучей, применении высокой температуры. Летальное действие высокой температуры обусловлено денатурацией белков, деградацией нуклеиновых кислот, липидов, мембран. Существуют различные способы стерилизации при помощи высокой температуры.
Прокаливание в пламени спиртовки – самый быстрый и достаточно надежный метод стерилизации. Метод имеет ограниченное применение, т.к. при его использовании портятся стерилизуемые предметы. Прокаливанием стерилизуют бактериальные петли и иглы, мелкий инструментарий.
Кипячение – это простой метод, но он не обеспечивает полного обеспложивания, т.к. споры бактерий не погибают. Стерилизуют кипячением в воде с добавлением 1% бикарбоната натрия в течение 45 мин иглы, шприцы, инструменты.
Стерилизация сухим жаром – проводится в особых аппаратах-печах Пастера или сухожаровых печах. Метод основан на бактерицидном действии нагретого до 165-180°С воздуха. Стерилизуют сухим жаром только сухие предметы, размещая их так, чтобы они не касались стенок шкафа и между ними свободно проникал нагретый воздух. Сухим жаром стерилизуют всю стеклянную посуду, градуированные и пастеровские пипетки, вату, марлю, обернутые в бумагу в течение 1 часа при 160-170°С. Применение температуры выше 170°С приводит в выгонке жирных и смолистых веществ из ваты и некоторых сортов оберточной бумаги, что может вызвать подавление роста микробов, поэтому при использовании температуры выше 170°С посуду стерилизуют в металлических пеналах.
Стерилизация паром не требует такой высокой температуры, как стерилизация сухим жаром, т.к. пар из-за большой теплопроводности действует на микробы эффективнее. Обеспложивание паром проводится при температуре 100-120°С. Существуют два способа стерилизации паром:
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.