Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 11

Схема 8

Ферменты бактерий

Условия появления             Конституитивные                Индуктивные

                                             

                                              Эндоферменты                   Экзоферменты

Локализация                         Цитоплазма

                                              Цитоплазматическая мембрана

                                              Периплазматическое пространство

Классификация       Гидролазы          Оксидоредуктазы            Трансферазы

 

                      Лиазы               Изомеразы                       Лигазы  

 

Значение в          Гидролитический         Участие в                      Перенос

жизнедея-             катализ белков,         окислительно-           определенных

тельности          жиров и углеводов     восстановительных         радикалов 

клетки                                                        процессах              

                  Участие в               Участие в                      Участие в реакциях

                соединении          изомеризации                      присоединения

              двух молекул         органических                       и отрыва групп

                                              соединений    

Методические указания к демонстрации

1.    Пестрых рядов с посевом и без посева микробов.

Изучение ферментативных свойств микробов является одним из основных дифференциально-диагностических методов для точного определения возбудителя болезни. Для этого изучают: 1) способность сбраживать углеводы - сахаролитические ферменты; 2) способность разлагать белки - протеолитические ферменты; 3) способность ре­дуцировать краски - окислительно-восстановительные ферменты.

Способность разлагать различные углеводы (как принято назы­вать сахара) обнаруживают при посеве на среды Гисса. Среды Гисса представляют собой набор питательных сред с углеводами (моносахариды: глюкоза, лактоза и др.; дисахариды: мальтоза, сахароза и др.; полисахариды: крахмал, декстрин и многоатомные спирты - маннит глицерин и др.) и индикатором. Индикаторы - это химические вещества, меняющие окраску при изменении рН среды. В питательные среды добавляют индикаторы, которые характеризуются высокой чувствитель­ностью, не угнетают жизнедеятельности микробов. Для регистрации изменений рН среды применяют индикаторы Андреде, кислый фуксин, бромкрезоловый пурпуровый, бромтимоловый синий и др. Изменение цвета среды указывает на образование кислоты или щелочи при ферментативной деятельности микробов, образование сероводорода, индола. Существуют индикаторы способные изменять окраску на ту или иную лишь при щелочной или кислой реакции, вне реакции они бесцветны. Например, индикатор Андреде и кислый фуксин имеют красную окраску при кислом значении рН, фенолфталеин – при щелочном, лакмусовая настойка при кислой реакции приобретает розовую окраску, при щелочной – синюю.  

Микробы способны разлагать углеводы с образованием альдегидов, кислот и газообразных продуктов. Образование кислых продуктов определяют по изменению цвета индикатора. Для улавливания газа в жидкой среде используют "поплавки" - стеклянные трубочки, запаян­ные с одного конца, из которых газ вытесняет среду; можно поместить в питательную среду комочки ваты, пузырьки газа будут удерживать­ся между волокнами ваты. В плотной среде наблюдают пузырьки газа или разрывы в толще агара.

Кроме того, сахаролитическую активность изучают на средах Эндо, Левина, Плоскирева. Микроорганизмы, сбраживающие лактозу, образуют окрашенные колонии. Кислота изменяет цвет индикатора, содержащегося в среде. Колонии микробов, не ферментирующие лактозу, бесцветны.

Таблица 9. Характеристика колоний энтеробактерий на некоторых дифференциально-диагностических средах.

Питательная среда	Дифферен-цирующий компонент	Индикатор	Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов
			положительно	отрицательно
Левина	лактоза	эозин, метиленовый синий	темно-синий с металлическим блеском	бесцветный
Эндо	лактоза	основной фуксин	красный с металлическим блеском	бесцветный
Плоскирева	лактоза	нейтральный красный	красный	бесцветный

Протеолитические свойства у бактерий изучают при посеве в столбик желатина. При наличии протеолитических ферментов проис­ходит разжижение желатина, процесс этот идет сверху. Обращают вни­мание также и на характер разжижения, так как разные виды микро­бов дают характерную для них форму разжижения: послойное, т.е. идет ровно сверху вниз, характерно для синегнойной палочки; в форму чулка дает стафилококк, в форме гвоздя – холерный вибрион. Протеолитическое действие микроорганизмов можно наблюдать при посевах на свернутую сыворотку, вокруг колоний появляется углубление.

Показателем глубокого расщепления белков служат аммиак, сероводород. Для выявления этих газов посев делают на пептонную воду или МПБ, вещества обнаруживает с помощью индикаторных бумажек, которые помещают над питательной средой так, чтобы они не прикасались к среде, прижимая бумажки к стеклу ватной пробкой.

Аммиак определяют по посинению розовой лакмусовой бумажки. Сероводород определяют с помощью фильтровальной бумажки, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. Образовавшийся сероводород взаимодействует с уксуснокислым свинцом, образуя сульфид свинца, вещество черного цвета, бумага в результате чернеет. Кроме того, для определения сероводорода можно делать посев культуры бактерий уколом в столбик питательной среды, содержащей соли для определения сероводорода. При наличии сероводорода среда чернеет.