Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть I, страница 19

Учету подлежат все красные и темно-красные колонии, с металлическим блеском и без него, выросшие на фильтрах. Подсчитывают число колоний каждого типа. Идентифицируют каждую выбранную изолированную колонию по морфологическим свойствам – готовят мазки-препараты и окрашивают по Граму; по биохимическим свойствам – способность ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа, оксидазную активность (для постановки пробы на оксидазу со среды Эндо снимают по 2-3 колонии каждого типа, наносят на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной диметилпарафенилендиамином). При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не меняется, при положительном – бума­га окрашивается в синий цвет в течение 1 мин). По 2-3 колонии каждого типа пересевают на среды Гисса с лактозой и инкубируют при 44°С в течение 24 часов.

          Результат анализа рассчитывают по следующей формуле:

                                                                             100

Х = а х

                         V

где Х – число колоний в 100 мл исследуемой воды; V – профильтрованный через фильтр объем воды; а – число всех колоний, выросших на фильтрах.

Полученный результат выражают в КОЕ в 100 мл воды.

Общие и термотолерантные колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл исследуемой воды.  

Определение ОКБ и ТБК в воде титрационным (бродильным) методом.

В качестве среды накопления используют глюкозопептонную среду, с индикатором бромтимоловым синим и поплавком.

1 день

При исследовании водопроводной воды делают посев 3 проб по 100,0 мл, 3 проб по 10,0 мл и 3 проб по 1,0 мл;

воды водоемов: не загрязненных сточными водами – в объеме 10,0; 1,0; 0,1; 0,01 мл; загрязненных сточными водами – в объеме 1,0; 0,1; 0,01; 0,001 мл; в зоне влияния сточных вод – в объеме 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 мл.

Причем для посевов боль­ших объемов (100 мл и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую десятикратные количества необходимых веществ, а малые объемы засевает в обычную глюкозопептонную среду. Посевы инку­бируют в течение 24 часов при 37°С.

2 день

Изучают посевы. Обращают внимание на помутнение среды, измене­ние ее окраски, что говорит об образовании кислоты из глюкозы, появление пузырьков газа в поплавке или ватке. Отсутствие измене­ния в среде уже на этом этапе позволяет закончить исследование и дать отрицательный результат.

Из проб с лактозоположительным ростом делают посевы секторами на чашки со средой Эндо. Посевы помещают в термостат при 37°С на 24 часа.  

3 день

Просматривают посевы на среде Эндо, учитывают темно-красные или красные колонии, с металлическим блеском или без него. Идентифицируют каждую выбранную изолированную колонию по морфологическим свойствам – готовят мазки-препараты и окрашивают по Граму; по биохимическим свойствам – способность ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа, оксидазную активность. По 2-3 колонии каждого типа пересевают на среды Гисса с лактозой и инкубируют при 44°С в течение 24 часов.

Розовые, бесцветные, пленчатые колонии и колонии грибов на среде Эндо не учитываются.

         При обнаружение, хотя бы в одном из трех объемов питьевой воды, ОКБ и ТБК, выдают ответ об наличие таковых в 100 мл исследуемой воды. Расчет количественным методом проводят по специальным таблицам 11, 12.

Таблица 11. Расчет наиболее вероятного числа бактерий (НВЧ) в 100 мл питьевой воды централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения.

Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл	Довери-тельный интервал (95%)		Число положительных результатов из 3-х объемов			НВЧ бактерий в 100 мл	Довери-тельный интервал (95%)
по 100 мл	по 10 мл	по 1 мл		ниж-ний	верх-ний	по 100 мл	по 10 мл	по 1 мл		ниж-ний	верх-ний
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2	0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0	1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0	0,3 * * 0,3 * * * 0,6 * * * * * * * 0,4 0,7 * * 0,7 1,1 * * 1,1 * * * * * * * 0,9	0 0,1 0,2 0,1 1,1 1,2 0.3 0,1 0,2 0,3 0,3 0,2 0,3 0,3 0,4 0,1 0,2 0,2 0,3 0,2 0,2 0,3 0,4 0,2 0,3 0,4 0,5 0,3 0,4 0,5 0,6 0,2	1,4 2,8 4,2 1,4 2,8 4,3 5,7 2,8 4,3 5,8 7,3 4,4 5,9 7,4 8,9 1,7 3,4 5,0 6,9 3,4 5,2 7,1 8,9 5,3 7,1 9,0 11,1 7,3 9,3 11,3 13,4 4,3	2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3	0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3	1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3	1,4 * * 1,5 2 * * 2 3 * * 3 * * * 2 4 6 * 4 8 12 * 9 15 21 29 24 46 110 ≥ 240	0,3 0,4 0,6 0,3 0,4 0,6 0,7 0,5 0,6 0,7 0,9 0,6 0,8 0,9 1,1 0,5 0,8 1,4 2,0 0,9 1,6 2,5 3,4 2,0 3,2 4,6 6,2 5,1 9,3 23,5 -	6,7 9,3 12,1 6,9 9,6 12,5 15,7 9,9 12,9 16,3 19,8 13,3 16,8 20,6 24,6 10,8 18,0 29,7 44,6 20,0 35,0 53,8 74,2 43,6 69,8 100,3 136,4 112,1 216,0 516,0 -