О микробной обсемененности
судят по микробному числу – это
общее количество микробов, содержащихся в 1 мл воды. Содержание санитарно-показательных
бактерий оценивается по двум показателям – коли-титру и коли-индексу. Коли-титр
– это наименьший объем воды, в котором обнаруживаются кишечные палочки. Коли-индекс
– это количество кишечных палочек содержащихся в 1 л воды. Коли-титр воды определяют бродильным методом и методом
мембранных фильтров.
Забор воды для бактериологического исследования.
Забор воды для бактериологического анализа производят в стерильные бутыли из стекла или одноразовую посуду емкостью не менее 500 мл с резиновыми или силиконовыми (но не ватно-марлевыми), плотно закрывающимися, пробками и защитными колпачками из алюминиевой фольги или плотной бумаги. Водопроводный кран, без резиновых шлангов и предварительного обжига, открывают, спускают воду и без изменения напора собирают не менее 500 мл воды. Емкости с пробами должны быть заполнены так, чтобы между водой и пробкой оставалось пространство (для предотвращения смачивания пробки при транспортировке). Пробы в емкостях закрывают пробками и стерильными колпачками, маркируют, прикрепляя этикетки или нанося надпись несмываемой краской, составляют акт о взятии проб воды, с указанием места и времени, даты отбора проб, характеристики водоисточника (температура воды, климатические условия окружающей среды), фамилию лица, взявшего пробу. Пробы питьевой воды должны быть помещены в контейнер-холодильник при температуре 4-10°С. Бактериологическое исследование должно производиться не позднее 6 часов с момента отбора проб, если пробы нельзя охладить, то проведение исследования должно состояться не позднее, чем через 2 часа после забора.
Методические указания к практической работе
Загрязненность воды определяется по общей микробной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов – индикаторов наличия выделений человека и животных. Для изучения общей обсемененности исследуемой воды определяют общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (МАФАМ), способных в результате инкубации при 37°С в течение 24 часов образовывать, видимые невооруженным глазом или при увеличении в два раза, колонии на питательной среде. Исследуют общее число МАФАМ в 1 мл воды.
Определение общего числа микроорганизмов в воде, образующих колонии на питательной среде.
При исследовании водопроводной воды берут не менее 2-х объемов по 1 мл;
вода водоемов: чистая – 1,0; 0,1 мл;
загрязненная – 0,01; 0,001 мл.
Для посева объемов 0,1 мл и меньше, исследуемую воду разводят стерильной дистиллированной водой, готовя 10-кратные разведения. По 1 мл каждого разведения засевают на питательную среду.
1 день
На дно стерильной чашки Петри наливают по 1 мл исследуемой воды (из каждой пробы не менее двух объемов), в эту же чашку выливают 8-12 мл МПА, расплавленного и остуженного до 45-49°С, интенсивно перемешивают питательную среду с водой, оставляют чашку на горизонтальной поверхности до застывания агара, после чего помещают в термостат на 24 часа при 37°С.
2 день
Подсчитывают все выросшие колонии (учитывают чашки на которых выросло не более 300 изолированных колоний) и производят расчет. Результат выражают в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1 мл воды.
Общее количество МАФАМ воды в 1 мл не должно превышать 100.
Загрязненность воды относительно санитарно-показательных микроорганизмов определяется по наличию общих и термотолерантных колиформных бактерий.
Общие колиформные бактерии (ОКБ) – это грамотрицательные палочки, неспорообразующие, растущие на лактозосодержащих средах типа Эндо, сбраживающие с образованием альдегида, кислоты и газа лактозу (маннит, глюкозу) при температуре 37°С в течение 24-48 часов и не обладающие оксидазной активностью.
Термотолерантные колиформные бактерии (ТБК) – это грамотрицательные палочки, неспорообразующие, растущие на лактозосодержащих средах типа Эндо, сбраживающие с образованием альдегида, кислоты и газа лактозу при температуре 44°С в течение 24 часов, не обладающие оксидазной активностью и не растущие на цитратной среде.
Определение ОКБ и ТБК в воде, согласно действующим МУ 2.1.4.1018-01, проводится мембранным и титрационным (бродильным) методами. Титрационный метод используется, если нет возможности провести исследование мембранный методом, по причине отсутствия материалов и оборудования, необходимых для выполнения или наличия в воде большого количества взвешенных частиц, микрофлоры, препятствующей получению изолированных колоний на фильтрах.
Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий в воде.
Объем исследуемой воды зависит от степени бактериального загрязнения воды:
водопроводная вода – 3 объема по 100,0 мл;
вода водоемов: чистая – в объеме 100,0; 50,0; 10,0; 1,0 мл; загрязненная сточными водами – в объеме 10,0; 1,0; 0,1; 0,01 мл; в зоне влияния выпуска сточных вод – 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 мл.
Определение ОКБ и ТБК в воде методом мембранной фильтрации.
Исследование воды при помощи мембранных фильтров основано на задержании на поверхности и в теле фильтра всех или почти всех бактерий, находящихся в воде, с последующим выращиванием на плотной питательной среде.
1 день
Исследуемые пробы фильтруют через мембранные фильтры (для получения стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 мл через один фильтр). Используют фильтровальный аппарат Зейтца. После окончания фильтрации фильтр снимают стерильным пинцетом и помещают фильтрующей поверхностью на среду Эндо по 3-4 фильтра, так чтобы они не соприкасались. Чашки с фильтрами инкубируют в термостате 24 часа при температуре 37°С.
2 день
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.